南京林业大学学报（自然科学版）
南京林業大學學報（自然科學版）
남경임업대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF NANJING FORESTRY UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE EDITION)
2013年
3期
6-10
,共5页
邱帅%丁信誉%席梦利%施季森
邱帥%丁信譽%席夢利%施季森
구수%정신예%석몽리%시계삼
东方百合%序列相关扩增多态性分子标记%体系优化%引物筛选
東方百閤%序列相關擴增多態性分子標記%體繫優化%引物篩選
동방백합%서렬상관확증다태성분자표기%체계우화%인물사선
以东方百合商品种‘索蚌’(‘Sorbonne’)和‘康斯坦撒’(‘Constantsa’)及其F1代杂交群体为实验材料,从100对SRAP引物中筛选出59对扩增产物丰富、具有较高多态性的引物,同时对PCR反应体系进行了优化.采用正交设计,对Mg2+、dNTPs、Taq聚合酶及引物浓度进行4因素4水平优化,并在此基础上对Mg2+、引物浓度和退火温度进行了单因素优化.结果表明,东方百合SRAP的最佳体系为:1×Buffer,Mg2+浓度2.7 mmol/L,dNTPs浓度0.25 mmol/L,引物浓度0.8μmol/L,Taq聚合酶1.5 μmol/min,模板DNA 60～100 ng.SRAP两步反应最佳退火温度为第1步35℃,第2步退火59.3℃.最后用‘索蚌’、‘康斯坦撒’和部分F1植株对优化体系进行稳定性检测,发现所筛选出的59对引物在优化的体系下均有稳定的扩增产物.
以東方百閤商品種‘索蚌’(‘Sorbonne’)和‘康斯坦撒’(‘Constantsa’)及其F1代雜交群體為實驗材料,從100對SRAP引物中篩選齣59對擴增產物豐富、具有較高多態性的引物,同時對PCR反應體繫進行瞭優化.採用正交設計,對Mg2+、dNTPs、Taq聚閤酶及引物濃度進行4因素4水平優化,併在此基礎上對Mg2+、引物濃度和退火溫度進行瞭單因素優化.結果錶明,東方百閤SRAP的最佳體繫為:1×Buffer,Mg2+濃度2.7 mmol/L,dNTPs濃度0.25 mmol/L,引物濃度0.8μmol/L,Taq聚閤酶1.5 μmol/min,模闆DNA 60～100 ng.SRAP兩步反應最佳退火溫度為第1步35℃,第2步退火59.3℃.最後用‘索蚌’、‘康斯坦撒’和部分F1植株對優化體繫進行穩定性檢測,髮現所篩選齣的59對引物在優化的體繫下均有穩定的擴增產物.
이동방백합상품충‘색방’(‘Sorbonne’)화‘강사탄살’(‘Constantsa’)급기F1대잡교군체위실험재료,종100대SRAP인물중사선출59대확증산물봉부、구유교고다태성적인물,동시대PCR반응체계진행료우화.채용정교설계,대Mg2+、dNTPs、Taq취합매급인물농도진행4인소4수평우화,병재차기출상대Mg2+、인물농도화퇴화온도진행료단인소우화.결과표명,동방백합SRAP적최가체계위:1×Buffer,Mg2+농도2.7 mmol/L,dNTPs농도0.25 mmol/L,인물농도0.8μmol/L,Taq취합매1.5 μmol/min,모판DNA 60～100 ng.SRAP량보반응최가퇴화온도위제1보35℃,제2보퇴화59.3℃.최후용‘색방’、‘강사탄살’화부분F1식주대우화체계진행은정성검측,발현소사선출적59대인물재우화적체계하균유은정적확증산물.
