南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2013年
6期
853-856
,共4页
张迎迎%何海棠%杨洁%侯金林
張迎迎%何海棠%楊潔%侯金林
장영영%하해당%양길%후금림
乙型肝炎病毒%肽核酸钳制PCR%直接测序法
乙型肝炎病毒%肽覈痠鉗製PCR%直接測序法
을형간염병독%태핵산겸제PCR%직접측서법
hepatitis B virus%peptide nucleic acid%PCR%direct sequencing
目的 建立乙型肝炎病毒肽核酸钳制PCR(PNA-PCR)耐药监测方法,以提前监测乙型肝炎病毒YMDD耐药株的产生.方法 选取rtM2041(ATT)、rtM204V(GTG)突变型质粒与野生型质粒rtM204(ATG)按照不同比例混合后,用PNA-PCR法及直接测序法对耐药位点进行检测,评价两种方法的灵敏度及特异性；选取临床耐药检测患者血清标本85例,采用PNA-PCR法及直接测序法进行耐药检测,比较两种方法的耐药检出率.结果 PNA-PCR法可在105倍野生型YMDD基因背景下检测出突变,灵敏度为0.001％,可检测到最低限为101拷贝.而直接测序法可检测的基因突变的最低极限为104拷贝,检测灵敏度为10％.85例临床耐药检测患者中,PNA-PCR法YMDD检测阳性率为85.9％(73/85:YIDD:40,YVDD:23,YIDD+YVDD:10),而PCR产物直接测序法检阳性率仅为40％ (34/85:YIDD:21,YVDD:11,YIDD+YVDD:2).阴性对照,两种方法均未测出HBV病毒,两种方法的特异性均较好.结论 PNA-PCR方法在灵敏度及特异性上均优于直接测序法,而且操作简便,快捷,在科研和临床上都有很好的应用前景.
目的 建立乙型肝炎病毒肽覈痠鉗製PCR(PNA-PCR)耐藥鑑測方法,以提前鑑測乙型肝炎病毒YMDD耐藥株的產生.方法 選取rtM2041(ATT)、rtM204V(GTG)突變型質粒與野生型質粒rtM204(ATG)按照不同比例混閤後,用PNA-PCR法及直接測序法對耐藥位點進行檢測,評價兩種方法的靈敏度及特異性；選取臨床耐藥檢測患者血清標本85例,採用PNA-PCR法及直接測序法進行耐藥檢測,比較兩種方法的耐藥檢齣率.結果 PNA-PCR法可在105倍野生型YMDD基因揹景下檢測齣突變,靈敏度為0.001％,可檢測到最低限為101拷貝.而直接測序法可檢測的基因突變的最低極限為104拷貝,檢測靈敏度為10％.85例臨床耐藥檢測患者中,PNA-PCR法YMDD檢測暘性率為85.9％(73/85:YIDD:40,YVDD:23,YIDD+YVDD:10),而PCR產物直接測序法檢暘性率僅為40％ (34/85:YIDD:21,YVDD:11,YIDD+YVDD:2).陰性對照,兩種方法均未測齣HBV病毒,兩種方法的特異性均較好.結論 PNA-PCR方法在靈敏度及特異性上均優于直接測序法,而且操作簡便,快捷,在科研和臨床上都有很好的應用前景.
목적 건립을형간염병독태핵산겸제PCR(PNA-PCR)내약감측방법,이제전감측을형간염병독YMDD내약주적산생.방법 선취rtM2041(ATT)、rtM204V(GTG)돌변형질립여야생형질립rtM204(ATG)안조불동비례혼합후,용PNA-PCR법급직접측서법대내약위점진행검측,평개량충방법적령민도급특이성；선취림상내약검측환자혈청표본85례,채용PNA-PCR법급직접측서법진행내약검측,비교량충방법적내약검출솔.결과 PNA-PCR법가재105배야생형YMDD기인배경하검측출돌변,령민도위0.001％,가검측도최저한위101고패.이직접측서법가검측적기인돌변적최저겁한위104고패,검측령민도위10％.85례림상내약검측환자중,PNA-PCR법YMDD검측양성솔위85.9％(73/85:YIDD:40,YVDD:23,YIDD+YVDD:10),이PCR산물직접측서법검양성솔부위40％ (34/85:YIDD:21,YVDD:11,YIDD+YVDD:2).음성대조,량충방법균미측출HBV병독,량충방법적특이성균교호.결론 PNA-PCR방법재령민도급특이성상균우우직접측서법,이차조작간편,쾌첩,재과연화림상상도유흔호적응용전경.
