南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2013年
6期
847-852
,共6页
温扬明%蓝开健%王俊洁%余晶仪%屈娅荣%赵卫%张复春%谭万龙%曹虹
溫颺明%藍開健%王俊潔%餘晶儀%屈婭榮%趙衛%張複春%譚萬龍%曹虹
온양명%람개건%왕준길%여정의%굴아영%조위%장복춘%담만룡%조홍
登革病毒%哺乳动物细胞表面展示%全长人源抗体库
登革病毒%哺乳動物細胞錶麵展示%全長人源抗體庫
등혁병독%포유동물세포표면전시%전장인원항체고
dengue virus%mammalian cell surface display%full-length fully human antibody library
目的 应用哺乳动物细胞表面抗体展示技术构建登革病毒特异性全长人源抗体库.方法 采集登革确诊患者恢复期外周血,分离外周血淋巴细胞并提取其总RNA,用RT-PCR扩增全长Kappa轻链(LCk)和重链可变区(VH)基因,构建抗体轻链基因库和抗体重链基因库；将抗体基因库转染CHO细胞、用流式细胞仪分析抗体在CHO细胞表面的表达.结果 以1.2 μg总RNA为模板,用6套引物扩增全长Kappa轻链和重链可变区基因,插入表达载体,轻链基因库容量为1.45×104,重链基因库容量为1.8×105;随机挑选的10个轻链克隆和10个重链克隆,经过测序鉴定,轻链有8个含有正确的阅读框架,编码8个不同的氨基酸序列,重链有7个含有正确的阅读框架,编码7个不同的氨基酸序列.流式细胞仪分析含有正确阅读框架的单克隆和抗体基因库,均检测到全长抗体在CHO细胞表面的表达,抗体库中可表达的抗体多样性达到109.结论 以1.2 μg总RNA为模板,通过RT-PCR扩增,成功构建可表达库容量达到109的登革病毒特异性全长人抗体基因库.
目的 應用哺乳動物細胞錶麵抗體展示技術構建登革病毒特異性全長人源抗體庫.方法 採集登革確診患者恢複期外週血,分離外週血淋巴細胞併提取其總RNA,用RT-PCR擴增全長Kappa輕鏈(LCk)和重鏈可變區(VH)基因,構建抗體輕鏈基因庫和抗體重鏈基因庫；將抗體基因庫轉染CHO細胞、用流式細胞儀分析抗體在CHO細胞錶麵的錶達.結果 以1.2 μg總RNA為模闆,用6套引物擴增全長Kappa輕鏈和重鏈可變區基因,插入錶達載體,輕鏈基因庫容量為1.45×104,重鏈基因庫容量為1.8×105;隨機挑選的10箇輕鏈剋隆和10箇重鏈剋隆,經過測序鑒定,輕鏈有8箇含有正確的閱讀框架,編碼8箇不同的氨基痠序列,重鏈有7箇含有正確的閱讀框架,編碼7箇不同的氨基痠序列.流式細胞儀分析含有正確閱讀框架的單剋隆和抗體基因庫,均檢測到全長抗體在CHO細胞錶麵的錶達,抗體庫中可錶達的抗體多樣性達到109.結論 以1.2 μg總RNA為模闆,通過RT-PCR擴增,成功構建可錶達庫容量達到109的登革病毒特異性全長人抗體基因庫.
목적 응용포유동물세포표면항체전시기술구건등혁병독특이성전장인원항체고.방법 채집등혁학진환자회복기외주혈,분리외주혈림파세포병제취기총RNA,용RT-PCR확증전장Kappa경련(LCk)화중련가변구(VH)기인,구건항체경련기인고화항체중련기인고；장항체기인고전염CHO세포、용류식세포의분석항체재CHO세포표면적표체.결과 이1.2 μg총RNA위모판,용6투인물확증전장Kappa경련화중련가변구기인,삽입표체재체,경련기인고용량위1.45×104,중련기인고용량위1.8×105;수궤도선적10개경련극륭화10개중련극륭,경과측서감정,경련유8개함유정학적열독광가,편마8개불동적안기산서렬,중련유7개함유정학적열독광가,편마7개불동적안기산서렬.류식세포의분석함유정학열독광가적단극륭화항체기인고,균검측도전장항체재CHO세포표면적표체,항체고중가표체적항체다양성체도109.결론 이1.2 μg총RNA위모판,통과RT-PCR확증,성공구건가표체고용량체도109적등혁병독특이성전장인항체기인고.
