南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2013年
6期
804-811
,共8页
杨红飞%郑文宏%赵文淘%关春燕%安靓
楊紅飛%鄭文宏%趙文淘%關春燕%安靚
양홍비%정문굉%조문도%관춘연%안정
miR-590%miR-590-5p%miR-590-3p%肝细胞肝癌%PDCD4%PTEN%增殖
miR-590%miR-590-5p%miR-590-3p%肝細胞肝癌%PDCD4%PTEN%增殖
miR-590%miR-590-5p%miR-590-3p%간세포간암%PDCD4%PTEN%증식
microRNA%miR-590-5p%miR-590-3p%hepatocellular carcinoma%PDCD4%PTEN%proliferation
目的 研究miR-590的两个臂-miR-590-5p和miR-590-3p对肝癌细胞增殖能力的影响,以及参与肿瘤发生发展的机制.方法 利用miRNA芯片、QPCR对肝癌标本和各细胞株miR-590的表达谱系进行分析和验证.通过脂质体将miR-590 mimic或inhibitor转染正常肝细胞或肝癌细胞,MTT生长曲线分析和软琼脂克隆形成实验检测转染后细胞增殖及存活能力的变化.Targetscan预测miR-590-5p和miR-590-3p的靶基因,并通过萤光素酶报告系统以及western blot进行验证.结果 miRNA芯片结果显示3个肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织相对于癌旁正常组织,miR-590-5p和miR-590-3p表达上调.通过QPCR验证了10例临床HCC肿瘤标本发现80％的HCC组织相对于癌旁组织miR-590-5p和miR-590-3p均同步显著上调.QPCR结果进一步发现,HepG2、Hep3B、Huh7三株HCC细胞株相对于正常肝细胞株L-O2 miR-590-5p/3p同样表达上调.MTT和软琼脂克隆形成结果显示,L-O2分别过表达miR-590-5p和miR-590-3p,细胞的增殖能力都显著增加(P＜0.05)；而HepG2、Hep3B、Huh7分别下调miR-590-5p和miR-590-3p的表达后,细胞的增殖能力也都显著降低(P＜0.05).Targetscan预测,PDCD4和PTEN分别作为miR-590-5p和miR-590-3p的潜在靶基因.萤光素酶报告系统以及western blot结果显示miR-590-5p和miR-590-3p可以分别直接下调靶基因PDCD4和PTEN的表达(P＜0.05).进一步我们发现miR-590-3p通过下调PTEN激活PI3K-AKT信号通路,促进AKTl-S473的磷酸化水平.结论在HCC发展过程中miR-590扮演着重要的致癌因子角色,我们结果发现miR-590的两个臂都具有促进肿瘤发生的生物学功能,它们分别通过靶向调节抑癌基因PDCD4和PTEN的表达来促进HCC细胞的增殖和存活,并激活核心的PI3K-AKT肿瘤信号通路.由此可见miR-590在HCC发生发展过程中具有重要的意义,也可作为临床诊治潜在的新靶标.
目的 研究miR-590的兩箇臂-miR-590-5p和miR-590-3p對肝癌細胞增殖能力的影響,以及參與腫瘤髮生髮展的機製.方法 利用miRNA芯片、QPCR對肝癌標本和各細胞株miR-590的錶達譜繫進行分析和驗證.通過脂質體將miR-590 mimic或inhibitor轉染正常肝細胞或肝癌細胞,MTT生長麯線分析和軟瓊脂剋隆形成實驗檢測轉染後細胞增殖及存活能力的變化.Targetscan預測miR-590-5p和miR-590-3p的靶基因,併通過螢光素酶報告繫統以及western blot進行驗證.結果 miRNA芯片結果顯示3箇肝細胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)組織相對于癌徬正常組織,miR-590-5p和miR-590-3p錶達上調.通過QPCR驗證瞭10例臨床HCC腫瘤標本髮現80％的HCC組織相對于癌徬組織miR-590-5p和miR-590-3p均同步顯著上調.QPCR結果進一步髮現,HepG2、Hep3B、Huh7三株HCC細胞株相對于正常肝細胞株L-O2 miR-590-5p/3p同樣錶達上調.MTT和軟瓊脂剋隆形成結果顯示,L-O2分彆過錶達miR-590-5p和miR-590-3p,細胞的增殖能力都顯著增加(P＜0.05)；而HepG2、Hep3B、Huh7分彆下調miR-590-5p和miR-590-3p的錶達後,細胞的增殖能力也都顯著降低(P＜0.05).Targetscan預測,PDCD4和PTEN分彆作為miR-590-5p和miR-590-3p的潛在靶基因.螢光素酶報告繫統以及western blot結果顯示miR-590-5p和miR-590-3p可以分彆直接下調靶基因PDCD4和PTEN的錶達(P＜0.05).進一步我們髮現miR-590-3p通過下調PTEN激活PI3K-AKT信號通路,促進AKTl-S473的燐痠化水平.結論在HCC髮展過程中miR-590扮縯著重要的緻癌因子角色,我們結果髮現miR-590的兩箇臂都具有促進腫瘤髮生的生物學功能,它們分彆通過靶嚮調節抑癌基因PDCD4和PTEN的錶達來促進HCC細胞的增殖和存活,併激活覈心的PI3K-AKT腫瘤信號通路.由此可見miR-590在HCC髮生髮展過程中具有重要的意義,也可作為臨床診治潛在的新靶標.
목적 연구miR-590적량개비-miR-590-5p화miR-590-3p대간암세포증식능력적영향,이급삼여종류발생발전적궤제.방법 이용miRNA심편、QPCR대간암표본화각세포주miR-590적표체보계진행분석화험증.통과지질체장miR-590 mimic혹inhibitor전염정상간세포혹간암세포,MTT생장곡선분석화연경지극륭형성실험검측전염후세포증식급존활능력적변화.Targetscan예측miR-590-5p화miR-590-3p적파기인,병통과형광소매보고계통이급western blot진행험증.결과 miRNA심편결과현시3개간세포간암(hepatocellular carcinoma,HCC)조직상대우암방정상조직,miR-590-5p화miR-590-3p표체상조.통과QPCR험증료10례림상HCC종류표본발현80％적HCC조직상대우암방조직miR-590-5p화miR-590-3p균동보현저상조.QPCR결과진일보발현,HepG2、Hep3B、Huh7삼주HCC세포주상대우정상간세포주L-O2 miR-590-5p/3p동양표체상조.MTT화연경지극륭형성결과현시,L-O2분별과표체miR-590-5p화miR-590-3p,세포적증식능력도현저증가(P＜0.05)；이HepG2、Hep3B、Huh7분별하조miR-590-5p화miR-590-3p적표체후,세포적증식능력야도현저강저(P＜0.05).Targetscan예측,PDCD4화PTEN분별작위miR-590-5p화miR-590-3p적잠재파기인.형광소매보고계통이급western blot결과현시miR-590-5p화miR-590-3p가이분별직접하조파기인PDCD4화PTEN적표체(P＜0.05).진일보아문발현miR-590-3p통과하조PTEN격활PI3K-AKT신호통로,촉진AKTl-S473적린산화수평.결론재HCC발전과정중miR-590분연착중요적치암인자각색,아문결과발현miR-590적량개비도구유촉진종류발생적생물학공능,타문분별통과파향조절억암기인PDCD4화PTEN적표체래촉진HCC세포적증식화존활,병격활핵심적PI3K-AKT종류신호통로.유차가견miR-590재HCC발생발전과정중구유중요적의의,야가작위림상진치잠재적신파표.
