山东医药
山東醫藥
산동의약
SHANDONG MEDICAL JOURNAL
2013年
19期
11-14
,共4页
孙德旭%秦苏萍%王晓天%李小翠%刘志强
孫德旭%秦囌萍%王曉天%李小翠%劉誌彊
손덕욱%진소평%왕효천%리소취%류지강
FGF18%绿色荧光蛋白%细菌人工染色体%同源重组
FGF18%綠色熒光蛋白%細菌人工染色體%同源重組
FGF18%록색형광단백%세균인공염색체%동원중조
目的 构建由细菌人工染色体(BAC)携带的表达FGF18-绿色荧光蛋白(GFP)的重组体,用于生产转基因小鼠,筛选表达FGF18的特定细胞.方法 分别克隆FGF18基因启动子区域的5’同源臂和3’同源臂,插入到pBS-GFP-kan质粒的左右两段,构建携带FGF18同源臂的质粒.提取含有FGF18基因全长的bMQ-282D14 BAC,转化到SW105细菌中并筛选阳性克隆,之后再将带有FGF18基因同源臂的pBS-GFP-Kan质粒转化到该细菌内,在42℃实现基因同源重组,将GFP基因插入到FGF18基因的启动子区.结果 经过氯霉素与卡那霉素的正负筛选,选出FGF18-GFP阳性的菌株,提取出构建好的BAC.结论 成功构建了BAC携带的FGF18-GFP重组体,可用于转基因小鼠生产.
目的 構建由細菌人工染色體(BAC)攜帶的錶達FGF18-綠色熒光蛋白(GFP)的重組體,用于生產轉基因小鼠,篩選錶達FGF18的特定細胞.方法 分彆剋隆FGF18基因啟動子區域的5’同源臂和3’同源臂,插入到pBS-GFP-kan質粒的左右兩段,構建攜帶FGF18同源臂的質粒.提取含有FGF18基因全長的bMQ-282D14 BAC,轉化到SW105細菌中併篩選暘性剋隆,之後再將帶有FGF18基因同源臂的pBS-GFP-Kan質粒轉化到該細菌內,在42℃實現基因同源重組,將GFP基因插入到FGF18基因的啟動子區.結果 經過氯黴素與卡那黴素的正負篩選,選齣FGF18-GFP暘性的菌株,提取齣構建好的BAC.結論 成功構建瞭BAC攜帶的FGF18-GFP重組體,可用于轉基因小鼠生產.
목적 구건유세균인공염색체(BAC)휴대적표체FGF18-록색형광단백(GFP)적중조체,용우생산전기인소서,사선표체FGF18적특정세포.방법 분별극륭FGF18기인계동자구역적5’동원비화3’동원비,삽입도pBS-GFP-kan질립적좌우량단,구건휴대FGF18동원비적질립.제취함유FGF18기인전장적bMQ-282D14 BAC,전화도SW105세균중병사선양성극륭,지후재장대유FGF18기인동원비적pBS-GFP-Kan질립전화도해세균내,재42℃실현기인동원중조,장GFP기인삽입도FGF18기인적계동자구.결과 경과록매소여잡나매소적정부사선,선출FGF18-GFP양성적균주,제취출구건호적BAC.결론 성공구건료BAC휴대적FGF18-GFP중조체,가용우전기인소서생산.
