热带病与寄生虫学
熱帶病與寄生蟲學
열대병여기생충학
TROPICAL DISEASES AND PARASITOLOGY
2013年
2期
77-79
,共3页
叶芳%汪玉玲%王宏志%汪学龙
葉芳%汪玉玲%王宏誌%汪學龍
협방%왕옥령%왕굉지%왕학룡
日本血吸虫%Sj-Tsp6%样蛋白%克隆%表达
日本血吸蟲%Sj-Tsp6%樣蛋白%剋隆%錶達
일본혈흡충%Sj-Tsp6%양단백%극륭%표체
目的 为了寻找血吸虫病新的免疫学诊断候选分子,在大肠杆菌中高效表达日本血吸虫Sj-Tsp6 样融合蛋白.方法 设计特异性引物,PCR 法扩增出日本血吸虫Sj-Tsp6 样蛋白基因编码基因序列,T 载体连接,再将其亚克隆入pET28a(+)表达载体,经酶切、测序证实正确后,转化入大肠杆菌BL21 中,并用IPTG 对该重组菌诱导表达,用SDS-PAGE 和Western blot 方法观察表达结果.结果 PCR 法扩增出一条大小约为702bp 大小的Sj-Tsp6 样蛋白的DNA 片断,将目的 基因转入表达质粒pET28a(+),经SDS-PAGE 可见一条约28kDa 大小的带有HIS 标签的融合蛋白条带,此蛋白可被血吸虫病兔血清所识别.结论 本实验成功克隆日本血吸虫Sj-Tsp6 样抗原的编码基因,并在原核细胞中进行表达,为进一步验证其免疫诊断价值奠定了基础.
目的 為瞭尋找血吸蟲病新的免疫學診斷候選分子,在大腸桿菌中高效錶達日本血吸蟲Sj-Tsp6 樣融閤蛋白.方法 設計特異性引物,PCR 法擴增齣日本血吸蟲Sj-Tsp6 樣蛋白基因編碼基因序列,T 載體連接,再將其亞剋隆入pET28a(+)錶達載體,經酶切、測序證實正確後,轉化入大腸桿菌BL21 中,併用IPTG 對該重組菌誘導錶達,用SDS-PAGE 和Western blot 方法觀察錶達結果.結果 PCR 法擴增齣一條大小約為702bp 大小的Sj-Tsp6 樣蛋白的DNA 片斷,將目的 基因轉入錶達質粒pET28a(+),經SDS-PAGE 可見一條約28kDa 大小的帶有HIS 標籤的融閤蛋白條帶,此蛋白可被血吸蟲病兔血清所識彆.結論 本實驗成功剋隆日本血吸蟲Sj-Tsp6 樣抗原的編碼基因,併在原覈細胞中進行錶達,為進一步驗證其免疫診斷價值奠定瞭基礎.
목적 위료심조혈흡충병신적면역학진단후선분자,재대장간균중고효표체일본혈흡충Sj-Tsp6 양융합단백.방법 설계특이성인물,PCR 법확증출일본혈흡충Sj-Tsp6 양단백기인편마기인서렬,T 재체련접,재장기아극륭입pET28a(+)표체재체,경매절、측서증실정학후,전화입대장간균BL21 중,병용IPTG 대해중조균유도표체,용SDS-PAGE 화Western blot 방법관찰표체결과.결과 PCR 법확증출일조대소약위702bp 대소적Sj-Tsp6 양단백적DNA 편단,장목적 기인전입표체질립pET28a(+),경SDS-PAGE 가견일조약28kDa 대소적대유HIS 표첨적융합단백조대,차단백가피혈흡충병토혈청소식별.결론 본실험성공극륭일본혈흡충Sj-Tsp6 양항원적편마기인,병재원핵세포중진행표체,위진일보험증기면역진단개치전정료기출.
