中国实验诊断学
中國實驗診斷學
중국실험진단학
CHINESE JOURNAL OF LABORATORY DIAGNOSIS
2013年
4期
647-650
,共4页
银广悦%陈素萍%丁俊丽%张继领%刘继勇%张龙%张明
銀廣悅%陳素萍%丁俊麗%張繼領%劉繼勇%張龍%張明
은엄열%진소평%정준려%장계령%류계용%장룡%장명
贴壁法%骨髓间充质干细胞%体外培养%鉴定
貼壁法%骨髓間充質榦細胞%體外培養%鑒定
첩벽법%골수간충질간세포%체외배양%감정
目的 探讨骨髓间充质干细胞体外分离培养和鉴定方法,找到一种能在质和量上均能满足需要的体外培养条件.方法 无菌条件下分离处死后取小鼠双下肢骨,低糖DMEM培养液冲出骨髓,离心5 mins,用5 ml含10%胎牛血清的低糖DMEM培养液重悬细胞.加入等体积密度为1.073 g/L percoll分离液离心30 mins.取中层云雾状细胞.37℃、5%CO2培养箱中贴壁培养.取5-10代细胞培养至对数生长期后,洗涤离心.取100 μl细胞悬液分别加入相应抗体,避光孵育30 mins,洗涤离心.流式细胞仪检测,CELLQUEST软件收集数据.结果 骨髓间充质干细胞是一类纺锤形或梭形细胞,与纤维细胞类似,顺向呈"鱼群样"排列.CD45、CD34、CD31呈阴性表达,表达率分别为0.82%,0.27%,0.97%;CD44、CD90、CD71呈阳性表达,表达率分别为99.8%,99.7%,99.36%.不同代数细胞表面分子的表达情况无明显差异(P＞0.05).结论 贴壁培养法能够在质和量上满足骨髓间充质干细胞的体外培养条件.
目的 探討骨髓間充質榦細胞體外分離培養和鑒定方法,找到一種能在質和量上均能滿足需要的體外培養條件.方法 無菌條件下分離處死後取小鼠雙下肢骨,低糖DMEM培養液遲齣骨髓,離心5 mins,用5 ml含10%胎牛血清的低糖DMEM培養液重懸細胞.加入等體積密度為1.073 g/L percoll分離液離心30 mins.取中層雲霧狀細胞.37℃、5%CO2培養箱中貼壁培養.取5-10代細胞培養至對數生長期後,洗滌離心.取100 μl細胞懸液分彆加入相應抗體,避光孵育30 mins,洗滌離心.流式細胞儀檢測,CELLQUEST軟件收集數據.結果 骨髓間充質榦細胞是一類紡錘形或梭形細胞,與纖維細胞類似,順嚮呈"魚群樣"排列.CD45、CD34、CD31呈陰性錶達,錶達率分彆為0.82%,0.27%,0.97%;CD44、CD90、CD71呈暘性錶達,錶達率分彆為99.8%,99.7%,99.36%.不同代數細胞錶麵分子的錶達情況無明顯差異(P＞0.05).結論 貼壁培養法能夠在質和量上滿足骨髓間充質榦細胞的體外培養條件.
목적 탐토골수간충질간세포체외분리배양화감정방법,조도일충능재질화량상균능만족수요적체외배양조건.방법 무균조건하분리처사후취소서쌍하지골,저당DMEM배양액충출골수,리심5 mins,용5 ml함10%태우혈청적저당DMEM배양액중현세포.가입등체적밀도위1.073 g/L percoll분리액리심30 mins.취중층운무상세포.37℃、5%CO2배양상중첩벽배양.취5-10대세포배양지대수생장기후,세조리심.취100 μl세포현액분별가입상응항체,피광부육30 mins,세조리심.류식세포의검측,CELLQUEST연건수집수거.결과 골수간충질간세포시일류방추형혹사형세포,여섬유세포유사,순향정"어군양"배렬.CD45、CD34、CD31정음성표체,표체솔분별위0.82%,0.27%,0.97%;CD44、CD90、CD71정양성표체,표체솔분별위99.8%,99.7%,99.36%.불동대수세포표면분자적표체정황무명현차이(P＞0.05).결론 첩벽배양법능구재질화량상만족골수간충질간세포적체외배양조건.
