中国实验诊断学
中國實驗診斷學
중국실험진단학
CHINESE JOURNAL OF LABORATORY DIAGNOSIS
2013年
4期
639-643
,共5页
赵强%吕爽%翟颖仙%高振平%石英爱
趙彊%呂爽%翟穎仙%高振平%石英愛
조강%려상%적영선%고진평%석영애
人脂肪来源干细胞%成骨分化
人脂肪來源榦細胞%成骨分化
인지방래원간세포%성골분화
目的 体外分离、培养、扩增及鉴定人脂肪来源干细胞(human adipose-derived stem cells,hASCs),并向成骨诱导分化,为临床骨组织重建提供种子细胞.方法 应用胶原酶消化法和贴壁筛选法相结合从人手术切除的脂肪组织中提取hASCs.MTS法绘制hASCs生长曲线;利用流式细胞术检测hASCs表面标志;以低糖DMEM含10%FBS及1%青/链霉素为基础培养基,含1nM地塞米松,10mM 磷酸甘油,0.05 mM维生素C的条件培养基连续培养4w进行体外成骨诱导,并利用硫酸茜红素 S(Alizarin Red S)染色检测钙沉积情况.结果 成功从人脂肪组织中分离、提取了hASCs并在体外扩增.hASCs呈成纤维细胞样生长.生长曲线显示hASCs增生分裂能力活跃.hASCs表面标志表达CD29,CD44,CD73,CD105和CD166,不表达CD31,CD34,CD45和HLA-DR.成骨诱导4w后,经硫酸茜红素S染色可见:细胞呈复层生长,细胞外富集细胞外基质,基质经染色呈现橘红色,数量多,成结节状或成片状存在,并出现钙盐结节,证明有钙盐沉积.结论 成功建立了一种简单有效的体外分离和培养hASCs的方法.获得的hASCs生长增殖旺盛、保存方便,具有多向分化能力.hASCs可以作为细胞移植治疗和组织工程理想的种子细胞.
目的 體外分離、培養、擴增及鑒定人脂肪來源榦細胞(human adipose-derived stem cells,hASCs),併嚮成骨誘導分化,為臨床骨組織重建提供種子細胞.方法 應用膠原酶消化法和貼壁篩選法相結閤從人手術切除的脂肪組織中提取hASCs.MTS法繪製hASCs生長麯線;利用流式細胞術檢測hASCs錶麵標誌;以低糖DMEM含10%FBS及1%青/鏈黴素為基礎培養基,含1nM地塞米鬆,10mM 燐痠甘油,0.05 mM維生素C的條件培養基連續培養4w進行體外成骨誘導,併利用硫痠茜紅素 S(Alizarin Red S)染色檢測鈣沉積情況.結果 成功從人脂肪組織中分離、提取瞭hASCs併在體外擴增.hASCs呈成纖維細胞樣生長.生長麯線顯示hASCs增生分裂能力活躍.hASCs錶麵標誌錶達CD29,CD44,CD73,CD105和CD166,不錶達CD31,CD34,CD45和HLA-DR.成骨誘導4w後,經硫痠茜紅素S染色可見:細胞呈複層生長,細胞外富集細胞外基質,基質經染色呈現橘紅色,數量多,成結節狀或成片狀存在,併齣現鈣鹽結節,證明有鈣鹽沉積.結論 成功建立瞭一種簡單有效的體外分離和培養hASCs的方法.穫得的hASCs生長增殖旺盛、保存方便,具有多嚮分化能力.hASCs可以作為細胞移植治療和組織工程理想的種子細胞.
목적 체외분리、배양、확증급감정인지방래원간세포(human adipose-derived stem cells,hASCs),병향성골유도분화,위림상골조직중건제공충자세포.방법 응용효원매소화법화첩벽사선법상결합종인수술절제적지방조직중제취hASCs.MTS법회제hASCs생장곡선;이용류식세포술검측hASCs표면표지;이저당DMEM함10%FBS급1%청/련매소위기출배양기,함1nM지새미송,10mM 린산감유,0.05 mM유생소C적조건배양기련속배양4w진행체외성골유도,병이용류산천홍소 S(Alizarin Red S)염색검측개침적정황.결과 성공종인지방조직중분리、제취료hASCs병재체외확증.hASCs정성섬유세포양생장.생장곡선현시hASCs증생분렬능력활약.hASCs표면표지표체CD29,CD44,CD73,CD105화CD166,불표체CD31,CD34,CD45화HLA-DR.성골유도4w후,경류산천홍소S염색가견:세포정복층생장,세포외부집세포외기질,기질경염색정현귤홍색,수량다,성결절상혹성편상존재,병출현개염결절,증명유개염침적.결론 성공건립료일충간단유효적체외분리화배양hASCs적방법.획득적hASCs생장증식왕성、보존방편,구유다향분화능력.hASCs가이작위세포이식치료화조직공정이상적충자세포.
