植物病理学报
植物病理學報
식물병이학보
ACTA PHYTOPATHOLOGICA SINICA
2013年
1期
20-26
,共7页
蒋磊%邓竹根%谢朝阳%杨友志%李祥宇%丁菲%江彤
蔣磊%鄧竹根%謝朝暘%楊友誌%李祥宇%丁菲%江彤
장뢰%산죽근%사조양%양우지%리상우%정비%강동
草莓镶脉病毒%ORFⅡ基因%克隆%原核表达%多抗血清
草莓鑲脈病毒%ORFⅡ基因%剋隆%原覈錶達%多抗血清
초매양맥병독%ORFⅡ기인%극륭%원핵표체%다항혈청
用CTAB法从感染草莓镶脉病毒(Strawberry vein banding virus,SVBV)的草莓叶片中提取总DNA,设计特异性引物扩增SVBV中国分离物ORFⅡ基因,克隆并测序.结果表明,SVBV中国分离物ORFⅡ基因全长486 nts,编码161个氨基酸.将其与SVBV美国分离物以及花椰菜花叶病毒属其他成员的ORFⅡ基因相比较,结果表明,SVBV中国分离物ORFⅡ基因与SVBV美国分离物的核苷酸序列相似性最高,达91.2％.将SVBV ORFⅡ基因插入原核表达载体pET32a(+),重组质粒pET-ORFⅡ转化大肠杆菌BL21(DE3).经IPTG诱导及Ni2+-NTA亲和柱纯化,获得分子质量约为38 kDa的融合蛋白.以此纯化的融合蛋白为抗原免疫家兔,可以制备出高效价的抗血清.Western blot分析表明,制备的抗血清能与重组融合蛋白发生特异性反应.利用抗血清进行ELISA测定,能够检测出感病草莓植株病汁液中SVBV ORFⅡ基因表达的蛋白.
用CTAB法從感染草莓鑲脈病毒(Strawberry vein banding virus,SVBV)的草莓葉片中提取總DNA,設計特異性引物擴增SVBV中國分離物ORFⅡ基因,剋隆併測序.結果錶明,SVBV中國分離物ORFⅡ基因全長486 nts,編碼161箇氨基痠.將其與SVBV美國分離物以及花椰菜花葉病毒屬其他成員的ORFⅡ基因相比較,結果錶明,SVBV中國分離物ORFⅡ基因與SVBV美國分離物的覈苷痠序列相似性最高,達91.2％.將SVBV ORFⅡ基因插入原覈錶達載體pET32a(+),重組質粒pET-ORFⅡ轉化大腸桿菌BL21(DE3).經IPTG誘導及Ni2+-NTA親和柱純化,穫得分子質量約為38 kDa的融閤蛋白.以此純化的融閤蛋白為抗原免疫傢兔,可以製備齣高效價的抗血清.Western blot分析錶明,製備的抗血清能與重組融閤蛋白髮生特異性反應.利用抗血清進行ELISA測定,能夠檢測齣感病草莓植株病汁液中SVBV ORFⅡ基因錶達的蛋白.
용CTAB법종감염초매양맥병독(Strawberry vein banding virus,SVBV)적초매협편중제취총DNA,설계특이성인물확증SVBV중국분리물ORFⅡ기인,극륭병측서.결과표명,SVBV중국분리물ORFⅡ기인전장486 nts,편마161개안기산.장기여SVBV미국분리물이급화야채화협병독속기타성원적ORFⅡ기인상비교,결과표명,SVBV중국분리물ORFⅡ기인여SVBV미국분리물적핵감산서렬상사성최고,체91.2％.장SVBV ORFⅡ기인삽입원핵표체재체pET32a(+),중조질립pET-ORFⅡ전화대장간균BL21(DE3).경IPTG유도급Ni2+-NTA친화주순화,획득분자질량약위38 kDa적융합단백.이차순화적융합단백위항원면역가토,가이제비출고효개적항혈청.Western blot분석표명,제비적항혈청능여중조융합단백발생특이성반응.이용항혈청진행ELISA측정,능구검측출감병초매식주병즙액중SVBV ORFⅡ기인표체적단백.
