新疆农业大学学报
新疆農業大學學報
신강농업대학학보
JOURNAL OF XINJIANG AGRICULTURAL UNIVERSITY
2013年
2期
108-111
,共4页
孙建华%何晶%石明%徐全圆%杨夷平%冉多良
孫建華%何晶%石明%徐全圓%楊夷平%冉多良
손건화%하정%석명%서전원%양이평%염다량
马疱疹病毒%原核表达%gD基因
馬皰疹病毒%原覈錶達%gD基因
마포진병독%원핵표체%gD기인
equine herpesviruses%prokaryotic expression%gD gene
根据GenBank上已发表的马疱疹病毒1型(EHV-1)和马疱疹病毒4型(EHV-4) gD基因序列,设计一对特异性引物.将扩增的EHV-1gD基因片段克隆至pET-30a表达载体,筛选获得重组质粒pET-30a-gD.经鉴定证明pET-30a-gD原核载体构建成功.将其转化入BL-21大肠杆菌中用IPTG进行诱导表达,并对培养时间、IPTG诱导浓度等培养条件进行优化,收集菌液进行SDS-PAGE检测,结果显示pET-30a-gD获得了高效融合表达,其表达的蛋白分子量约为29 kD.Western blot分析结果表明,显示获得的融合蛋白与EHV-1/EHV-4阳性血清发生特异性反应,具有良好的免疫原性.
根據GenBank上已髮錶的馬皰疹病毒1型(EHV-1)和馬皰疹病毒4型(EHV-4) gD基因序列,設計一對特異性引物.將擴增的EHV-1gD基因片段剋隆至pET-30a錶達載體,篩選穫得重組質粒pET-30a-gD.經鑒定證明pET-30a-gD原覈載體構建成功.將其轉化入BL-21大腸桿菌中用IPTG進行誘導錶達,併對培養時間、IPTG誘導濃度等培養條件進行優化,收集菌液進行SDS-PAGE檢測,結果顯示pET-30a-gD穫得瞭高效融閤錶達,其錶達的蛋白分子量約為29 kD.Western blot分析結果錶明,顯示穫得的融閤蛋白與EHV-1/EHV-4暘性血清髮生特異性反應,具有良好的免疫原性.
근거GenBank상이발표적마포진병독1형(EHV-1)화마포진병독4형(EHV-4) gD기인서렬,설계일대특이성인물.장확증적EHV-1gD기인편단극륭지pET-30a표체재체,사선획득중조질립pET-30a-gD.경감정증명pET-30a-gD원핵재체구건성공.장기전화입BL-21대장간균중용IPTG진행유도표체,병대배양시간、IPTG유도농도등배양조건진행우화,수집균액진행SDS-PAGE검측,결과현시pET-30a-gD획득료고효융합표체,기표체적단백분자량약위29 kD.Western blot분석결과표명,현시획득적융합단백여EHV-1/EHV-4양성혈청발생특이성반응,구유량호적면역원성.
