CAJ | 학술논문

盐角草(Salicornia europaea)是一种典型的耐盐植物,为了研究盐角草Cu/Zn-SOD基因在的盐胁迫耐受中的机制,本研究利用己知植物Cu/Zn-SOD基因的保守序列设计简并引物,采用RACE技术的方法从盐角草中扩增获得Cu/Zn-SOD基因.使用生物学软件分析其氨基酸序列,并进行同源性比对.构建原核表达载体,转化大肠杆菌(Escherichia coli),使目的蛋白在重组菌中表达,并分析了不同盐浓度并含有抗生素的液体LB培养基中菌的生长情况,IPTG诱导表达,通过测定OD600值来分析Cu/Zn-SOD基因的耐盐功能.结果通过简并引物PCR扩增和RACE技术,克隆出盐角草Cu/Zn-SOD基因.盐角草Cu/Zn-SOD基因(GenBank登录号:JQ074238.2)全长为660bp,开放阅读框长为459 bp,推测编码152个氨基酸,蛋白分子量约为15.1 kD,其氨基酸序列与碱蓬(Suaeda salsa)的序列相似性为96％,与黄灯笼辣椒(Capsicum chinense)的序列相似性为88％.生物学软件分析表明Cu/Zn-SOD蛋白可能存在于细胞质.构建原核表达载体pET-Cu/Zn-SOD和对照pETDuet-1,转化大肠杆菌BL21中.蛋白经IPTG诱导表达.经SDS-PAGE蛋白电泳检测发现表达蛋白条带大小与预期一致,说明目的蛋白成功表达.耐盐性分析表明重组菌BL21 (pET-Cu/Zn-SOD)在高盐度培养基中的生长明显优于对照菌BL21 (pETDuet-1),说明盐角草Cu/Zn-SOD基因可能在盐胁迫逆境中起到耐受性作用.
염각초(Salicornia europaea)시일충전형적내염식물,위료연구염각초Cu/Zn-SOD기인재적염협박내수중적궤제,본연구이용기지식물Cu/Zn-SOD기인적보수서렬설계간병인물,채용RACE기술적방법종염각초중확증획득Cu/Zn-SOD기인.사용생물학연건분석기안기산서렬,병진행동원성비대.구건원핵표체재체,전화대장간균(Escherichia coli),사목적단백재중조균중표체,병분석료불동염농도병함유항생소적액체LB배양기중균적생장정황,IPTG유도표체,통과측정OD600치래분석Cu/Zn-SOD기인적내염공능.결과통과간병인물PCR확증화RACE기술,극륭출염각초Cu/Zn-SOD기인.염각초Cu/Zn-SOD기인(GenBank등록호:JQ074238.2)전장위660bp,개방열독광장위459 bp,추측편마152개안기산,단백분자량약위15.1 kD,기안기산서렬여감봉(Suaeda salsa)적서렬상사성위96％,여황등롱랄초(Capsicum chinense)적서렬상사성위88％.생물학연건분석표명Cu/Zn-SOD단백가능존재우세포질.구건원핵표체재체pET-Cu/Zn-SOD화대조pETDuet-1,전화대장간균BL21중.단백경IPTG유도표체.경SDS-PAGE단백전영검측발현표체단백조대대소여예기일치,설명목적단백성공표체.내염성분석표명중조균BL21 (pET-Cu/Zn-SOD)재고염도배양기중적생장명현우우대조균BL21 (pETDuet-1),설명염각초Cu/Zn-SOD기인가능재염협박역경중기도내수성작용.