中国心血管杂志
中國心血管雜誌
중국심혈관잡지
CHINESE JOURNAL OF CARDIOVASOLOGY
2014年
3期
200-204
,共5页
冯智慧%赵林%刘晓华%焦淑贤%陈鹏
馮智慧%趙林%劉曉華%焦淑賢%陳鵬
풍지혜%조림%류효화%초숙현%진붕
内皮细胞%细胞增殖%迁移%与膜-细胞骨架连接蛋白家族结合的磷酸化蛋白50
內皮細胞%細胞增殖%遷移%與膜-細胞骨架連接蛋白傢族結閤的燐痠化蛋白50
내피세포%세포증식%천이%여막-세포골가련접단백가족결합적린산화단백50
Endothelial ceils%Cell proliferation%Migration%Ezrin-radixin-moesin-binding phosphoprotein 50
目的 探讨与膜-细胞骨架连接蛋白家族结合的磷酸化蛋白50 (EBP50)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)内Akt1磷酸化水平、细胞分泌明胶酶的活性以及细胞骨架表达和分布的影响,阐明其影响人血管内皮细胞增殖、迁移及成管的分子机制.方法 构建EBP50的真核重组表达载体,将重组质粒分别稳定转染HUVEC细胞系,经Western blot法验证后,采用MTT法检测细胞的增殖活性;应用划痕法检测细胞的迁移能力;应用Matrigel法检测细胞的成管能力;应用Western blot检测EBP50对Akt1磷酸化水平的影响;应用明胶酶谱法检测HUVEC细胞分泌的明胶酶活性;应用免疫荧光观察细胞骨架的分布.结果 转染的外源性EBP50 cDNA片段已整合到基因组中;与对照组细胞比较,EBP50能显著抑制细胞的增殖、迁移及成管能力,并且EBP50明显下调Akt1的磷酸化水平(=2.98,P＜0.01);同时使HUVEC分泌的MMP2活性下降,并影响血管内皮细胞内细胞骨架的分布.结论 EBP50可以抑制HUVEC细胞的增殖、迁移及成管,其机制可能与调整Akt1的磷酸化水平、调节细胞分泌明胶酶的活性及影响微丝细胞骨架分布有关.
目的 探討與膜-細胞骨架連接蛋白傢族結閤的燐痠化蛋白50 (EBP50)對人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)內Akt1燐痠化水平、細胞分泌明膠酶的活性以及細胞骨架錶達和分佈的影響,闡明其影響人血管內皮細胞增殖、遷移及成管的分子機製.方法 構建EBP50的真覈重組錶達載體,將重組質粒分彆穩定轉染HUVEC細胞繫,經Western blot法驗證後,採用MTT法檢測細胞的增殖活性;應用劃痕法檢測細胞的遷移能力;應用Matrigel法檢測細胞的成管能力;應用Western blot檢測EBP50對Akt1燐痠化水平的影響;應用明膠酶譜法檢測HUVEC細胞分泌的明膠酶活性;應用免疫熒光觀察細胞骨架的分佈.結果 轉染的外源性EBP50 cDNA片段已整閤到基因組中;與對照組細胞比較,EBP50能顯著抑製細胞的增殖、遷移及成管能力,併且EBP50明顯下調Akt1的燐痠化水平(=2.98,P＜0.01);同時使HUVEC分泌的MMP2活性下降,併影響血管內皮細胞內細胞骨架的分佈.結論 EBP50可以抑製HUVEC細胞的增殖、遷移及成管,其機製可能與調整Akt1的燐痠化水平、調節細胞分泌明膠酶的活性及影響微絲細胞骨架分佈有關.
목적 탐토여막-세포골가련접단백가족결합적린산화단백50 (EBP50)대인제정맥내피세포(HUVEC)내Akt1린산화수평、세포분비명효매적활성이급세포골가표체화분포적영향,천명기영향인혈관내피세포증식、천이급성관적분자궤제.방법 구건EBP50적진핵중조표체재체,장중조질립분별은정전염HUVEC세포계,경Western blot법험증후,채용MTT법검측세포적증식활성;응용화흔법검측세포적천이능력;응용Matrigel법검측세포적성관능력;응용Western blot검측EBP50대Akt1린산화수평적영향;응용명효매보법검측HUVEC세포분비적명효매활성;응용면역형광관찰세포골가적분포.결과 전염적외원성EBP50 cDNA편단이정합도기인조중;여대조조세포비교,EBP50능현저억제세포적증식、천이급성관능력,병차EBP50명현하조Akt1적린산화수평(=2.98,P＜0.01);동시사HUVEC분비적MMP2활성하강,병영향혈관내피세포내세포골가적분포.결론 EBP50가이억제HUVEC세포적증식、천이급성관,기궤제가능여조정Akt1적린산화수평、조절세포분비명효매적활성급영향미사세포골가분포유관.
