CAJ | 학술논문

目的建立自然杀伤细胞(NK)的分离、培养方法,并检测其杀伤活性.方法抽取健康人外周血20 ml,采用淋巴分离液分离单个核细胞,再用苯丙氨酸甲酯(PME)去除单核巨噬细胞、B 细胞,从而纯化单个核细胞.培养3 ~ 5 h,收集黏附于培养板底部表面的细胞(即A-NK 细胞),重新培养2 周.实验过程中用显微镜观察细胞形态,用流式细胞术检测标志性抗原,用MTT 法检测杀伤率.结果单个核细胞在诱导的第3 天开始出现集落,第7 天时集落达到高峰.流式细胞术检测第7 天的表面抗原,CD3- 为96.5 ﹪,CD3- 中CD16+ 和CD56+ 双阳性的占31 ﹪.MTT 法检测诱导培养的第1 天和第4 天的杀伤率,效靶比在20:1 时杀伤率最高分别是(58.86 ± 4.12) ﹪和(54.42 ± 3.02) ﹪ ;当检测第7 天,效靶比在5:1 时杀伤率最高(46.71 ± 3.41) ﹪ ;第10 天,效靶比在10:1 时杀伤率最高(63.27 ± 3.18) ﹪;检测第14 天,效靶比在5:1 的情况下,杀伤率是最高(72.63 ± 2.65) ﹪.结论本实验室通过贴壁和诱导的方法可以快速获得纯度高、杀伤活性强的NK 细胞.
목적 건립자연살상세포(NK)적분리、배양방법,병검측기살상활성.방법 추취건강인외주혈20 ml,채용림파분리액분리단개핵세포,재용분병안산갑지(PME)거제단핵거서세포、B 세포,종이순화단개핵세포.배양3 ~ 5 h,수집점부우배양판저부표면적세포(즉A-NK 세포),중신배양2 주.실험과정중용현미경관찰세포형태,용류식세포술검측표지성항원,용MTT 법검측살상솔.결과 단개핵세포재유도적제3 천개시출현집락,제7 천시집락체도고봉.류식세포술검측제7 천적표면항원,CD3- 위96.5 ﹪,CD3- 중CD16+ 화CD56+ 쌍양성적점31 ﹪.MTT 법검측유도배양적제1 천화제4 천적살상솔,효파비재20:1 시살상솔최고분별시(58.86 ± 4.12) ﹪화(54.42 ± 3.02) ﹪ ;당검측제7 천,효파비재5:1 시살상솔최고(46.71 ± 3.41) ﹪ ;제10 천,효파비재10:1 시살상솔최고(63.27 ± 3.18) ﹪;검측제14 천,효파비재5:1 적정황하,살상솔시최고(72.63 ± 2.65) ﹪.결론 본실험실통과첩벽화유도적방법가이쾌속획득순도고、살상활성강적NK 세포.