中华细胞与干细胞杂志（电子版）
中華細胞與榦細胞雜誌（電子版）
중화세포여간세포잡지（전자판）
CHINESE JOURNAL OF CELL AND STEM CELL
2012年
4期
261-268
,共8页
陶然%李进%张克%马世武%姜维%李溢柔%周向军
陶然%李進%張剋%馬世武%薑維%李溢柔%週嚮軍
도연%리진%장극%마세무%강유%리일유%주향군
树突细胞%腺病毒%肝炎核心抗原,乙型%T淋巴细胞,细胞毒性
樹突細胞%腺病毒%肝炎覈心抗原,乙型%T淋巴細胞,細胞毒性
수돌세포%선병독%간염핵심항원,을형%T림파세포,세포독성
目的 本研究利用重组腺病毒载体将乙肝病毒基因导入树突状细胞(DC)内表达成内源性蛋白,探索DC 体外抗原负载并诱导乙肝病毒(HBV)特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的有效方法.方法 分离外周血单个核细胞(PBMC)并诱导成DC.用HFP3 肽辅助腺病毒载体进行抗原负载,检测DC 细胞内乙肝核心抗原基因的表达,比较成熟前后DC 的表面分子,研究DC 诱导的乙肝病毒核心抗原(HBcAg)特异性CTL 的增殖.应用统计软件SPSS17.0 进行统计分析,以P <0.05 为差异有统计学意义.结果 重组腺病毒CHB3 感染的DC 能有效表达HBcAg 蛋白.HFP3 辅助感染能显著提高感染效率达3 ~ 10 倍.腺病毒载体负载的DC 表面CD80、CD86、CCR7 的表达有所上调,但差异无统计学意义(平均荧光强度CHB3/iDC:CD80,46.2 ± 14.6 / 29.9 ± 7.9,P = 0.209 ;CD86,142.0± 12.9 / 113.3 ± 6.5,P = 0.430 ;CCR7,49.3 ± 3.0 / 36.4 ± 4.6,P = 0.054).Cocktail 促成熟后,CD80、CD83、CD86、CCR7 显著上调(平均荧光强度Cocktail-CHB3/iDC:CD80,97.1± 8.1 / 29.9 ± 7.9,P = 0.0019 ;CD83,75.4 ± 8.4 / 26.8 ± 1.5,P = 0.017 ;CD86,176.2 ± 14.8 /113.3 ± 6.5,P = 0.021 ;CCR7,75.3 ± 3.4 / 36.4 ± 4.6,P = 0.0016),HLA-DR 分子维持高表达.CHB3 负载的DC 与自体T 细胞共培养,可检测到HBcAg 特异性CTL 比例明显增高(1 例由0.25 ﹪增至1.98 ﹪,另1 例由0.19 ﹪增至1.37 ﹪).结论 在优化的条件下,重组腺病毒载体CHB3 能够有效地介导抗原蛋白HBcAg 在DC 内高水平表达,加入HFP3 辅助感染能在较低的感染剂量下获得较高的感染效率,有利于维持DC 的活性.重组腺病毒载体CHB3 结合HFP3 的抗原负载方案能有效地诱导HBcAg 特异性CTL.
目的 本研究利用重組腺病毒載體將乙肝病毒基因導入樹突狀細胞(DC)內錶達成內源性蛋白,探索DC 體外抗原負載併誘導乙肝病毒(HBV)特異性細胞毒性T淋巴細胞(CTL)的有效方法.方法 分離外週血單箇覈細胞(PBMC)併誘導成DC.用HFP3 肽輔助腺病毒載體進行抗原負載,檢測DC 細胞內乙肝覈心抗原基因的錶達,比較成熟前後DC 的錶麵分子,研究DC 誘導的乙肝病毒覈心抗原(HBcAg)特異性CTL 的增殖.應用統計軟件SPSS17.0 進行統計分析,以P <0.05 為差異有統計學意義.結果 重組腺病毒CHB3 感染的DC 能有效錶達HBcAg 蛋白.HFP3 輔助感染能顯著提高感染效率達3 ~ 10 倍.腺病毒載體負載的DC 錶麵CD80、CD86、CCR7 的錶達有所上調,但差異無統計學意義(平均熒光彊度CHB3/iDC:CD80,46.2 ± 14.6 / 29.9 ± 7.9,P = 0.209 ;CD86,142.0± 12.9 / 113.3 ± 6.5,P = 0.430 ;CCR7,49.3 ± 3.0 / 36.4 ± 4.6,P = 0.054).Cocktail 促成熟後,CD80、CD83、CD86、CCR7 顯著上調(平均熒光彊度Cocktail-CHB3/iDC:CD80,97.1± 8.1 / 29.9 ± 7.9,P = 0.0019 ;CD83,75.4 ± 8.4 / 26.8 ± 1.5,P = 0.017 ;CD86,176.2 ± 14.8 /113.3 ± 6.5,P = 0.021 ;CCR7,75.3 ± 3.4 / 36.4 ± 4.6,P = 0.0016),HLA-DR 分子維持高錶達.CHB3 負載的DC 與自體T 細胞共培養,可檢測到HBcAg 特異性CTL 比例明顯增高(1 例由0.25 ﹪增至1.98 ﹪,另1 例由0.19 ﹪增至1.37 ﹪).結論 在優化的條件下,重組腺病毒載體CHB3 能夠有效地介導抗原蛋白HBcAg 在DC 內高水平錶達,加入HFP3 輔助感染能在較低的感染劑量下穫得較高的感染效率,有利于維持DC 的活性.重組腺病毒載體CHB3 結閤HFP3 的抗原負載方案能有效地誘導HBcAg 特異性CTL.
목적 본연구이용중조선병독재체장을간병독기인도입수돌상세포(DC)내표체성내원성단백,탐색DC 체외항원부재병유도을간병독(HBV)특이성세포독성T림파세포(CTL)적유효방법.방법 분리외주혈단개핵세포(PBMC)병유도성DC.용HFP3 태보조선병독재체진행항원부재,검측DC 세포내을간핵심항원기인적표체,비교성숙전후DC 적표면분자,연구DC 유도적을간병독핵심항원(HBcAg)특이성CTL 적증식.응용통계연건SPSS17.0 진행통계분석,이P <0.05 위차이유통계학의의.결과 중조선병독CHB3 감염적DC 능유효표체HBcAg 단백.HFP3 보조감염능현저제고감염효솔체3 ~ 10 배.선병독재체부재적DC 표면CD80、CD86、CCR7 적표체유소상조,단차이무통계학의의(평균형광강도CHB3/iDC:CD80,46.2 ± 14.6 / 29.9 ± 7.9,P = 0.209 ;CD86,142.0± 12.9 / 113.3 ± 6.5,P = 0.430 ;CCR7,49.3 ± 3.0 / 36.4 ± 4.6,P = 0.054).Cocktail 촉성숙후,CD80、CD83、CD86、CCR7 현저상조(평균형광강도Cocktail-CHB3/iDC:CD80,97.1± 8.1 / 29.9 ± 7.9,P = 0.0019 ;CD83,75.4 ± 8.4 / 26.8 ± 1.5,P = 0.017 ;CD86,176.2 ± 14.8 /113.3 ± 6.5,P = 0.021 ;CCR7,75.3 ± 3.4 / 36.4 ± 4.6,P = 0.0016),HLA-DR 분자유지고표체.CHB3 부재적DC 여자체T 세포공배양,가검측도HBcAg 특이성CTL 비례명현증고(1 례유0.25 ﹪증지1.98 ﹪,령1 례유0.19 ﹪증지1.37 ﹪).결론 재우화적조건하,중조선병독재체CHB3 능구유효지개도항원단백HBcAg 재DC 내고수평표체,가입HFP3 보조감염능재교저적감염제량하획득교고적감염효솔,유리우유지DC 적활성.중조선병독재체CHB3 결합HFP3 적항원부재방안능유효지유도HBcAg 특이성CTL.
