中华细胞与干细胞杂志（电子版）
中華細胞與榦細胞雜誌（電子版）
중화세포여간세포잡지（전자판）
CHINESE JOURNAL OF CELL AND STEM CELL
2012年
4期
245-253
,共9页
黄梁浒%张瑞华%吴瑾%陈建%谭建明%郑丰
黃樑滸%張瑞華%吳瑾%陳建%譚建明%鄭豐
황량호%장서화%오근%진건%담건명%정봉
肿瘤坏死因子α%肿瘤坏死因子受体1%内质网应激%急性肾损伤%真核翻译起始因子2α
腫瘤壞死因子α%腫瘤壞死因子受體1%內質網應激%急性腎損傷%真覈翻譯起始因子2α
종류배사인자α%종류배사인자수체1%내질망응격%급성신손상%진핵번역기시인자2α
目的 本研究拟从衣霉素诱导的内质网应激反应着手,观察肿瘤坏死因子α(TNFα)及TNF 受体1、受体2(TNFR1、TNFR2)在急性肾组织损伤过程中的作用.方法 采用衣霉素腹腔注射TNFα、TNFR1、TNFR2 基因敲除小鼠及TNFR1R2 联合基因敲除小鼠,造成其肾组织急性内质网应激反应和急性肾损伤,对各种小鼠肾组织分别进行病理染色、mRNA 和蛋白水平表达检测、凋亡细胞染色、免疫组化染色和油红O 染色等.在体外应用免疫印迹方法,检测TNFR1 基因敲除小鼠肾近曲小管细胞的真核翻译起始因子2α(eIF2α)的磷酸化蛋白表达水平,并检测磷酸化酶抑制剂(salubrinal)作用后eIF2α的磷酸化水平.结果 与C57 小鼠相比,TNFα基因敲除小鼠对衣霉素引起的肾损伤更严重,且其病变主要位于肾近曲小管,表现为广泛的空泡变性、脂质聚积和细胞凋亡.提前24 h 用TNFα腹腔注射TNFα基因敲除小鼠,能逆转衣霉素引起的肾损伤.用衣霉素作用于TNFR1、TNFR2基因敲除小鼠,发现只有TNFR1 基因敲除小鼠出现严重的肾损伤,而TNFR2 基因敲除小鼠未出现类似的反应,提示TNFα主要通过TNFR1 通路发挥作用.衣霉素诱导的急性内质网应激反应,未引起TNFα和TNFR1 基因敲除小鼠肾组织中eIF2α的活化(磷酸化).在体外,衣霉素也未引起TNFR1 基因敲除小鼠肾近曲小管细胞的eIF2α磷酸化,反而造成小管细胞凋亡增加;eIF2α磷酸化酶抑制剂作用于TNFR1 基因敲除小鼠肾小管细胞后,能明显提高eIF2α的磷酸化,降低小管细胞凋亡率.结论 阻断TNFα/TNFR1 信号通路能导致肾组织eIF2α失调,提高了对急性内质网应激损伤的敏感性.
目的 本研究擬從衣黴素誘導的內質網應激反應著手,觀察腫瘤壞死因子α(TNFα)及TNF 受體1、受體2(TNFR1、TNFR2)在急性腎組織損傷過程中的作用.方法 採用衣黴素腹腔註射TNFα、TNFR1、TNFR2 基因敲除小鼠及TNFR1R2 聯閤基因敲除小鼠,造成其腎組織急性內質網應激反應和急性腎損傷,對各種小鼠腎組織分彆進行病理染色、mRNA 和蛋白水平錶達檢測、凋亡細胞染色、免疫組化染色和油紅O 染色等.在體外應用免疫印跡方法,檢測TNFR1 基因敲除小鼠腎近麯小管細胞的真覈翻譯起始因子2α(eIF2α)的燐痠化蛋白錶達水平,併檢測燐痠化酶抑製劑(salubrinal)作用後eIF2α的燐痠化水平.結果 與C57 小鼠相比,TNFα基因敲除小鼠對衣黴素引起的腎損傷更嚴重,且其病變主要位于腎近麯小管,錶現為廣汎的空泡變性、脂質聚積和細胞凋亡.提前24 h 用TNFα腹腔註射TNFα基因敲除小鼠,能逆轉衣黴素引起的腎損傷.用衣黴素作用于TNFR1、TNFR2基因敲除小鼠,髮現隻有TNFR1 基因敲除小鼠齣現嚴重的腎損傷,而TNFR2 基因敲除小鼠未齣現類似的反應,提示TNFα主要通過TNFR1 通路髮揮作用.衣黴素誘導的急性內質網應激反應,未引起TNFα和TNFR1 基因敲除小鼠腎組織中eIF2α的活化(燐痠化).在體外,衣黴素也未引起TNFR1 基因敲除小鼠腎近麯小管細胞的eIF2α燐痠化,反而造成小管細胞凋亡增加;eIF2α燐痠化酶抑製劑作用于TNFR1 基因敲除小鼠腎小管細胞後,能明顯提高eIF2α的燐痠化,降低小管細胞凋亡率.結論 阻斷TNFα/TNFR1 信號通路能導緻腎組織eIF2α失調,提高瞭對急性內質網應激損傷的敏感性.
목적 본연구의종의매소유도적내질망응격반응착수,관찰종류배사인자α(TNFα)급TNF 수체1、수체2(TNFR1、TNFR2)재급성신조직손상과정중적작용.방법 채용의매소복강주사TNFα、TNFR1、TNFR2 기인고제소서급TNFR1R2 연합기인고제소서,조성기신조직급성내질망응격반응화급성신손상,대각충소서신조직분별진행병리염색、mRNA 화단백수평표체검측、조망세포염색、면역조화염색화유홍O 염색등.재체외응용면역인적방법,검측TNFR1 기인고제소서신근곡소관세포적진핵번역기시인자2α(eIF2α)적린산화단백표체수평,병검측린산화매억제제(salubrinal)작용후eIF2α적린산화수평.결과 여C57 소서상비,TNFα기인고제소서대의매소인기적신손상경엄중,차기병변주요위우신근곡소관,표현위엄범적공포변성、지질취적화세포조망.제전24 h 용TNFα복강주사TNFα기인고제소서,능역전의매소인기적신손상.용의매소작용우TNFR1、TNFR2기인고제소서,발현지유TNFR1 기인고제소서출현엄중적신손상,이TNFR2 기인고제소서미출현유사적반응,제시TNFα주요통과TNFR1 통로발휘작용.의매소유도적급성내질망응격반응,미인기TNFα화TNFR1 기인고제소서신조직중eIF2α적활화(린산화).재체외,의매소야미인기TNFR1 기인고제소서신근곡소관세포적eIF2α린산화,반이조성소관세포조망증가;eIF2α린산화매억제제작용우TNFR1 기인고제소서신소관세포후,능명현제고eIF2α적린산화,강저소관세포조망솔.결론 조단TNFα/TNFR1 신호통로능도치신조직eIF2α실조,제고료대급성내질망응격손상적민감성.
