CAJ | 학술논문

海洋微生物是几丁质酶的重要来源.本研究从青岛海域海蜇(Rhopilema esculenta)体中分离到一株产几丁质酶的细菌QDC01,通过形态、培养特征以及16S rDNA序列同源性分析,将该菌株鉴定为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila).根据已报道的嗜水气单胞菌几丁质酶基因相关序列设计引物,克隆了QDC01几丁质酶基因,命名为ahchi(GenBank:JX863407).应用生物信息学软件对获得的基因序列及编码的蛋白序列进行分析,结果显示,ahchi开放阅读框(ORF)长2 100 bp,无内含子,其编码的蛋白由699个氨基酸组成,分子量为74.875 kD,等电点为5.81.序列比对和同源性分析结果表明,该基因与嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila subsp.hydrophila)ATCC 7966T几丁质酶基因(GenBank登录号:CP000462)的相似性最高,为98％；相应的氨基酸序列同源性为98％.系统进化分析以及Ahchi的保守结构域分析表明,Ahchi属于Ⅰ型几丁质酶,糖苷水解酶19家族.采用限制性内切酶(BamH Ⅰ和HindⅢ)双酶切法构建了原核表达载体pET-30a(+)-ahchi,并经IPTG诱导在大肠杆菌(Escherichia coli)中成功表达.在基础产酶发酵条件下,菌株QDC01所产粗酶液酶活力达0.21 U/mL,采用文献报道的优化产酶发酵条件,菌株QDC01所产粗酶液酶活力可达0.58 U/mL,是前人报道的产几丁质酶嗜水气单胞菌SWCH-6所产酶活力的1.49倍,同时也高于已报道的气单胞菌(Aeromonas sp.)CJ-5的酶活力(0.41 U/mL),为微生物源几丁质酶开发应用提供了又一优良种质资源.
해양미생물시궤정질매적중요래원.본연구종청도해역해철(Rhopilema esculenta)체중분리도일주산궤정질매적세균QDC01,통과형태、배양특정이급16S rDNA서렬동원성분석,장해균주감정위기수기단포균(Aeromonas hydrophila).근거이보도적기수기단포균궤정질매기인상관서렬설계인물,극륭료QDC01궤정질매기인,명명위ahchi(GenBank:JX863407).응용생물신식학연건대획득적기인서렬급편마적단백서렬진행분석,결과현시,ahchi개방열독광(ORF)장2 100 bp,무내함자,기편마적단백유699개안기산조성,분자량위74.875 kD,등전점위5.81.서렬비대화동원성분석결과표명,해기인여기수기단포균(Aeromonas hydrophila subsp.hydrophila)ATCC 7966T궤정질매기인(GenBank등록호:CP000462)적상사성최고,위98％；상응적안기산서렬동원성위98％.계통진화분석이급Ahchi적보수결구역분석표명,Ahchi속우Ⅰ형궤정질매,당감수해매19가족.채용한제성내절매(BamH Ⅰ화HindⅢ)쌍매절법구건료원핵표체재체pET-30a(+)-ahchi,병경IPTG유도재대장간균(Escherichia coli)중성공표체.재기출산매발효조건하,균주QDC01소산조매액매활력체0.21 U/mL,채용문헌보도적우화산매발효조건,균주QDC01소산조매액매활력가체0.58 U/mL,시전인보도적산궤정질매기수기단포균SWCH-6소산매활력적1.49배,동시야고우이보도적기단포균(Aeromonas sp.)CJ-5적매활력(0.41 U/mL),위미생물원궤정질매개발응용제공료우일우량충질자원.