CAJ | 학술논문

体外培养的奶牛,绵羊和小鼠的附植前胚胎在热应激条件下能够合成热休克蛋白70以增强胚胎的耐热性保护其不受热损伤.而钙调蛋白(CaM)是细胞内最重要的Ca2+受体蛋白并参与细胞活动中重要基因的转录活动.本实验旨在研究CaM参与小鼠(Mus musculus)胚胎热应激诱导型热休克蛋白70(HSP70)的表达,且明确CaM参与HSP70表达的具体途径.将发育至早期囊胚的胚胎分成空白对照(37℃)组、W7处理非热应激(37℃+W7)组、热应激(39℃)组和W7处理热应激(39℃+W7)组.提取总RNA并分别检测HSP70、CaM和热休克转录因子1(HSFl) mRNA表达；提取胞浆蛋白用Western blot技术检测HSP70、CaM和HSF1表达；用免疫共沉淀法检测HSP70-CaM和HSP70-HSF1复合物.结果发现,W7能显著抑制39℃热应激1h小鼠胚胎HSP70 mRNA和蛋白的表达(P＜0.05); W7对其他各组胚胎HSF1mRNA表达的影响不显著(P＞0.05),但能显著降低39℃热应激1h小鼠胚胎HSF1蛋白表达(P＜0.05); 39℃热应激时,胚胎HSP70-CaM复合物增多,HSP70-HSF1复合物减少.本研究表明,小鼠胚胎受热应激时,CaM通过与HSP70竞争性结合,解离出HSF1,从而使HSP70大量表达.本研究揭示了CaM参与小鼠胚胎热激反应中HSP70表达的一种途径.可为研究胚胎耐热性以及热激信号转导提供基础资料.
체외배양적내우,면양화소서적부식전배태재열응격조건하능구합성열휴극단백70이증강배태적내열성보호기불수열손상.이개조단백(CaM)시세포내최중요적Ca2+수체단백병삼여세포활동중중요기인적전록활동.본실험지재연구CaM삼여소서(Mus musculus)배태열응격유도형열휴극단백70(HSP70)적표체,차명학CaM삼여HSP70표체적구체도경.장발육지조기낭배적배태분성공백대조(37℃)조、W7처리비열응격(37℃+W7)조、열응격(39℃)조화W7처리열응격(39℃+W7)조.제취총RNA병분별검측HSP70、CaM화열휴극전록인자1(HSFl) mRNA표체；제취포장단백용Western blot기술검측HSP70、CaM화HSF1표체；용면역공침정법검측HSP70-CaM화HSP70-HSF1복합물.결과발현,W7능현저억제39℃열응격1h소서배태HSP70 mRNA화단백적표체(P＜0.05); W7대기타각조배태HSF1mRNA표체적영향불현저(P＞0.05),단능현저강저39℃열응격1h소서배태HSF1단백표체(P＜0.05); 39℃열응격시,배태HSP70-CaM복합물증다,HSP70-HSF1복합물감소.본연구표명,소서배태수열응격시,CaM통과여HSP70경쟁성결합,해리출HSF1,종이사HSP70대량표체.본연구게시료CaM삼여소서배태열격반응중HSP70표체적일충도경.가위연구배태내열성이급열격신호전도제공기출자료.