农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2013年
6期
641-649
,共9页
周厚成%李刚%赵霞%王子成%郭蔼光
週厚成%李剛%趙霞%王子成%郭藹光
주후성%리강%조하%왕자성%곽애광
草莓%果实%抑制差减杂交(SSH)%基因表达%qRT-PCR
草莓%果實%抑製差減雜交(SSH)%基因錶達%qRT-PCR
초매%과실%억제차감잡교(SSH)%기인표체%qRT-PCR
Strawberry(Fragaria ananassa Duch.)%Fruit%Suppression Subtractive Hybridization%Gene expression%qRT-PCR
寻找控制草莓果实硬度、成熟软化和褐化等性状相关基因并进行有效的调控具有现实意义,本研究分别以丰香草莓(Fragaria×ananassa Duch.cv.Toyonoka)果实大绿果期和转色期两个发育阶段的cDNA为实验组(tester)和驱动组(driver),利用抑制差减杂交(suppression subtraction hybridization,SSH)技术构建了正反两个cDNA文库,分别包含516和524个克隆.通过EST测序、序列拼接后,共获得707条uniESTs,其中正反向文库分别为369和338个非冗余序列(uniESTs),包括123条拼接序列(contigs)和584条单一序列(singletons).在Nt库比对中有537条uinESTs与已知基因匹配,占比75.95%;在Nr库比对中有509条序列有匹配蛋白,占比71.99%.有193个uniESTs能进行Geney ontology(GO)功能注释,其中细胞组分被注释了315次、分子功能被注释了332次、生物过程被注释了409次.uniESTs的功能分析显示,绿果期文库多数与细胞营养生长、分裂、早期胚胎发育和营养运输有关,转色期文库主要与刺激代谢物形成、色素合成、果实软化和种子成熟有关,与草莓果实发育和成熟生理过程基本一致.采用qRT-PCR对果实成熟相关蛋白(putative ripening-related protein)、多聚半乳糖醛酸酶(polygalacturonase,PG)、MYB转录因子(MYB transcription factor,MYB)、类异黄酮还原酶(isoflavone reductase-like gene,IRL)、胚胎发育晚期丰富蛋白(later embryo abundant protein,LEA)、乙烯受体Etrl(ethylene receptor Etrl)等6个基因在草莓果实发育、成熟期在根、叶、花中的表达模式进行了分析,研究结果为进一步研究草莓果实发育和成熟机制提供基础资料.
尋找控製草莓果實硬度、成熟軟化和褐化等性狀相關基因併進行有效的調控具有現實意義,本研究分彆以豐香草莓(Fragaria×ananassa Duch.cv.Toyonoka)果實大綠果期和轉色期兩箇髮育階段的cDNA為實驗組(tester)和驅動組(driver),利用抑製差減雜交(suppression subtraction hybridization,SSH)技術構建瞭正反兩箇cDNA文庫,分彆包含516和524箇剋隆.通過EST測序、序列拼接後,共穫得707條uniESTs,其中正反嚮文庫分彆為369和338箇非冗餘序列(uniESTs),包括123條拼接序列(contigs)和584條單一序列(singletons).在Nt庫比對中有537條uinESTs與已知基因匹配,佔比75.95%;在Nr庫比對中有509條序列有匹配蛋白,佔比71.99%.有193箇uniESTs能進行Geney ontology(GO)功能註釋,其中細胞組分被註釋瞭315次、分子功能被註釋瞭332次、生物過程被註釋瞭409次.uniESTs的功能分析顯示,綠果期文庫多數與細胞營養生長、分裂、早期胚胎髮育和營養運輸有關,轉色期文庫主要與刺激代謝物形成、色素閤成、果實軟化和種子成熟有關,與草莓果實髮育和成熟生理過程基本一緻.採用qRT-PCR對果實成熟相關蛋白(putative ripening-related protein)、多聚半乳糖醛痠酶(polygalacturonase,PG)、MYB轉錄因子(MYB transcription factor,MYB)、類異黃酮還原酶(isoflavone reductase-like gene,IRL)、胚胎髮育晚期豐富蛋白(later embryo abundant protein,LEA)、乙烯受體Etrl(ethylene receptor Etrl)等6箇基因在草莓果實髮育、成熟期在根、葉、花中的錶達模式進行瞭分析,研究結果為進一步研究草莓果實髮育和成熟機製提供基礎資料.
심조공제초매과실경도、성숙연화화갈화등성상상관기인병진행유효적조공구유현실의의,본연구분별이봉향초매(Fragaria×ananassa Duch.cv.Toyonoka)과실대록과기화전색기량개발육계단적cDNA위실험조(tester)화구동조(driver),이용억제차감잡교(suppression subtraction hybridization,SSH)기술구건료정반량개cDNA문고,분별포함516화524개극륭.통과EST측서、서렬병접후,공획득707조uniESTs,기중정반향문고분별위369화338개비용여서렬(uniESTs),포괄123조병접서렬(contigs)화584조단일서렬(singletons).재Nt고비대중유537조uinESTs여이지기인필배,점비75.95%;재Nr고비대중유509조서렬유필배단백,점비71.99%.유193개uniESTs능진행Geney ontology(GO)공능주석,기중세포조분피주석료315차、분자공능피주석료332차、생물과정피주석료409차.uniESTs적공능분석현시,록과기문고다수여세포영양생장、분렬、조기배태발육화영양운수유관,전색기문고주요여자격대사물형성、색소합성、과실연화화충자성숙유관,여초매과실발육화성숙생리과정기본일치.채용qRT-PCR대과실성숙상관단백(putative ripening-related protein)、다취반유당철산매(polygalacturonase,PG)、MYB전록인자(MYB transcription factor,MYB)、류이황동환원매(isoflavone reductase-like gene,IRL)、배태발육만기봉부단백(later embryo abundant protein,LEA)、을희수체Etrl(ethylene receptor Etrl)등6개기인재초매과실발육、성숙기재근、협、화중적표체모식진행료분석,연구결과위진일보연구초매과실발육화성숙궤제제공기출자료.