CAJ | 학술논문

雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook.f.)是一种多年生的木质藤本植物,生长周期长,次生代谢产物含量低,野生自然资源已经无法满足对其药用与农用的需求.为解决自然资源的短缺并保护雷公藤植物野生资源的生态环境,通过细胞工程技术生产雷公藤药用与农用活性物质是解决自然资源短缺,保护生态环境的途径之一.本研究中的雷公藤愈伤组织诱导自扦插一年生雷公藤叶片,将获得的愈伤组织建立细胞悬浮体系,诱导悬浮细胞得到生长稳定的胚状体培养体系.研究结果显示,添加60 mL/L椰汁的1/2 MS液体培养基可诱导愈伤组织形成浅绿色的胚状体,分离后的胚状体在1/2 MS添加0.5 mg/L a-萘乙酸(NAA)的液体培养基中可继续增殖分化.通过对接种量、培养基、装液量和pH值等培养条件的筛选和优化,在1/2MS培养基添加1.0 mg/L NAA和30g/L蔗糖,胚状体接种量为1.5 g/100 mL,pH值调至5.8,250 mL三角瓶中装液量为120 mL时最适合胚状体的培养生长；添加内生真菌诱导子,以生物量为指标,在1/2MS+0.5 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+Y1(叶的内生菌),pH 5.8时雷公藤甲素在胚状体中的含量是叶中的1.07倍,是自然根皮粉中的1.44倍；在1/2MS+0.5 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+G4(根的内生菌),pH 5.8时胚状体中总生物碱量17.02倍于叶中总生物碱量,1.46倍于自然根皮粉中总生物碱量.对3龄小菜蛾(Plutella xylostella)的毒杀试验表明,胚状体提取物与根皮粉提取物相似,100 mg处理浓度下,72 h时死亡率均在90％以上.通过雷公藤叶愈伤组织诱导的雷公藤胚状体培养体系,其次生代谢物(雷公藤甲素与雷公藤总生物碱)含量与野生雷公藤叶和根皮中的相当,胚状体提取物的杀虫活性与雷公藤根皮粉的杀虫活性无明显差异,说明雷公藤胚状体可作为解决雷公藤植物资源短缺的一条途径,为进一步研究和利用雷公藤这一植物资源提供基础资料. 雷公籐(Tripterygium wilfordii Hook.f.)是一種多年生的木質籐本植物,生長週期長,次生代謝產物含量低,野生自然資源已經無法滿足對其藥用與農用的需求.為解決自然資源的短缺併保護雷公籐植物野生資源的生態環境,通過細胞工程技術生產雷公籐藥用與農用活性物質是解決自然資源短缺,保護生態環境的途徑之一.本研究中的雷公籐愈傷組織誘導自扢插一年生雷公籐葉片,將穫得的愈傷組織建立細胞懸浮體繫,誘導懸浮細胞得到生長穩定的胚狀體培養體繫.研究結果顯示,添加60 mL/L椰汁的1/2 MS液體培養基可誘導愈傷組織形成淺綠色的胚狀體,分離後的胚狀體在1/2 MS添加0.5 mg/L a-萘乙痠(NAA)的液體培養基中可繼續增殖分化.通過對接種量、培養基、裝液量和pH值等培養條件的篩選和優化,在1/2MS培養基添加1.0 mg/L NAA和30g/L蔗糖,胚狀體接種量為1.5 g/100 mL,pH值調至5.8,250 mL三角瓶中裝液量為120 mL時最適閤胚狀體的培養生長；添加內生真菌誘導子,以生物量為指標,在1/2MS+0.5 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+Y1(葉的內生菌),pH 5.8時雷公籐甲素在胚狀體中的含量是葉中的1.07倍,是自然根皮粉中的1.44倍；在1/2MS+0.5 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+G4(根的內生菌),pH 5.8時胚狀體中總生物堿量17.02倍于葉中總生物堿量,1.46倍于自然根皮粉中總生物堿量.對3齡小菜蛾(Plutella xylostella)的毒殺試驗錶明,胚狀體提取物與根皮粉提取物相似,100 mg處理濃度下,72 h時死亡率均在90％以上.通過雷公籐葉愈傷組織誘導的雷公籐胚狀體培養體繫,其次生代謝物(雷公籐甲素與雷公籐總生物堿)含量與野生雷公籐葉和根皮中的相噹,胚狀體提取物的殺蟲活性與雷公籐根皮粉的殺蟲活性無明顯差異,說明雷公籐胚狀體可作為解決雷公籐植物資源短缺的一條途徑,為進一步研究和利用雷公籐這一植物資源提供基礎資料.
뢰공등(Tripterygium wilfordii Hook.f.)시일충다년생적목질등본식물,생장주기장,차생대사산물함량저,야생자연자원이경무법만족대기약용여농용적수구.위해결자연자원적단결병보호뢰공등식물야생자원적생태배경,통과세포공정기술생산뢰공등약용여농용활성물질시해결자연자원단결,보호생태배경적도경지일.본연구중적뢰공등유상조직유도자천삽일년생뢰공등협편,장획득적유상조직건립세포현부체계,유도현부세포득도생장은정적배상체배양체계.연구결과현시,첨가60 mL/L야즙적1/2 MS액체배양기가유도유상조직형성천록색적배상체,분리후적배상체재1/2 MS첨가0.5 mg/L a-내을산(NAA)적액체배양기중가계속증식분화.통과대접충량、배양기、장액량화pH치등배양조건적사선화우화,재1/2MS배양기첨가1.0 mg/L NAA화30g/L자당,배상체접충량위1.5 g/100 mL,pH치조지5.8,250 mL삼각병중장액량위120 mL시최괄합배상체적배양생장；첨가내생진균유도자,이생물량위지표,재1/2MS+0.5 mg/L NAA+30 g/L자당+Y1(협적내생균),pH 5.8시뢰공등갑소재배상체중적함량시협중적1.07배,시자연근피분중적1.44배；재1/2MS+0.5 mg/L NAA+30 g/L자당+G4(근적내생균),pH 5.8시배상체중총생물감량17.02배우협중총생물감량,1.46배우자연근피분중총생물감량.대3령소채아(Plutella xylostella)적독살시험표명,배상체제취물여근피분제취물상사,100 mg처리농도하,72 h시사망솔균재90％이상.통과뢰공등협유상조직유도적뢰공등배상체배양체계,기차생대사물(뢰공등갑소여뢰공등총생물감)함량여야생뢰공등협화근피중적상당,배상체제취물적살충활성여뢰공등근피분적살충활성무명현차이,설명뢰공등배상체가작위해결뢰공등식물자원단결적일조도경,위진일보연구화이용뢰공등저일식물자원제공기출자료.