CAJ | 학술논문

目的:初步探索基于犬肾小管上皮细胞(Madin-Darby canine kidney,MDCK)细胞单层的药物早期肾毒性检测方法.方法:将MDCK细胞培养于微孔滤膜上,待其形成完整的细胞单层.通过MTT试验分别选择对MDCK细胞没有明显抑制及具有明显抑制的不同质量浓度作用于细胞单层,24 h后进行荧光素钠透过性试验以及细胞单层两侧分泌的碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyl transpeptidase,γ-GT)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性检测,同时用扫描电镜观察细胞单层结构.结果:选择3.13,6.25,12.5 mg·L-13种质量浓度的马兜铃酸(aristolochic acid,AA)进行毒性检测,其对MDCK细胞生长的抑制率分别为-0.93％,0.93％和24.30％.AA 3.13 mg·L-1没有对细胞单层的完整性造成破坏,荧光素钠不能透过细胞单层,而AA 6.25,12.5 mg·L-1在与细胞作用30 min后,能明显增加荧光素钠的透过(P ＜0.05,P＜0.1),其中12.5 mg·L-1造成的荧光素钠透过率增加更多.各组细胞单层两侧ALP,γ-GT的分泌没有明显改变,但12.5 mg·L-1能使LDH的分泌显著增加(P＜0.05).扫描电镜观察显示,AA 6.25,12.5 mg·L-1组细胞单层结构被破坏,表面出现大量小球状物体,细胞单层破损而变得不完整,有不同程度的微孔滤膜露出.结论:基于MDCK细胞单层,在AA对细胞生长没有明显抑制的浓度(6.25 mg·L-1),可以检测到药物对细胞的毒性损伤,提示建立在微孔滤膜上的MDCK细胞单层体系可以用于药物肾毒性的早期检测.
목적:초보탐색기우견신소관상피세포(Madin-Darby canine kidney,MDCK)세포단층적약물조기신독성검측방법.방법:장MDCK세포배양우미공려막상,대기형성완정적세포단층.통과MTT시험분별선택대MDCK세포몰유명현억제급구유명현억제적불동질량농도작용우세포단층,24 h후진행형광소납투과성시험이급세포단층량측분비적감성린산매(alkaline phosphatase,ALP)、γ-곡안선전태매(γ-glutamyl transpeptidase,γ-GT)화유산탈경매(lactate dehydrogenase,LDH)활성검측,동시용소묘전경관찰세포단층결구.결과:선택3.13,6.25,12.5 mg·L-13충질량농도적마두령산(aristolochic acid,AA)진행독성검측,기대MDCK세포생장적억제솔분별위-0.93％,0.93％화24.30％.AA 3.13 mg·L-1몰유대세포단층적완정성조성파배,형광소납불능투과세포단층,이AA 6.25,12.5 mg·L-1재여세포작용30 min후,능명현증가형광소납적투과(P ＜0.05,P＜0.1),기중12.5 mg·L-1조성적형광소납투과솔증가경다.각조세포단층량측ALP,γ-GT적분비몰유명현개변,단12.5 mg·L-1능사LDH적분비현저증가(P＜0.05).소묘전경관찰현시,AA 6.25,12.5 mg·L-1조세포단층결구피파배,표면출현대량소구상물체,세포단층파손이변득불완정,유불동정도적미공려막로출.결론:기우MDCK세포단층,재AA대세포생장몰유명현억제적농도(6.25 mg·L-1),가이검측도약물대세포적독성손상,제시건립재미공려막상적MDCK세포단층체계가이용우약물신독성적조기검측.