CAJ | 학술논문

为研究microRNA(gga-miR-21)对传染性法氏囊病病毒(IBDV)复制的影响,本研究利用PCR方法从鸡的肝细胞基因组中扩增细胞pri-gga-miR-21,克隆于慢病毒表达质粒pL-EGFP中构建重组质粒pL-miR-21.将pL-miR-21与3个包装质粒pLP1、pLP2和pLP/VSVG共转染293FT细胞,制备含gga-miR-21基因的重组慢病毒VL+miR-21.将VL+miR-21感染DF-1细胞,经杀稻瘟菌素筛选获得过表达gga-miR-21的细胞株DF-miR-21,采用定量RT-PCR(qRT-PCR)检测表明,gga-miR-21的表达量比正常DF-1细胞提高60％.将IBDV接种于DF-miR-21细胞,在96 h后,其病毒滴度(104.75 TCID50/0.1 mL)显著低于正常DF-1细胞的病毒滴度(108.75 TCID50/0.1 mL).采用生物信息学方法和双荧光素酶报告系统分析验证,在IBDV基因组VP1基因中存在gga-miR-21的结合靶点.将IBDV感染DF-miR-21细胞,采用western blot分析,VP1蛋白的表达量比正常DF-1细胞显著降低；用qRT-PCR分析,VP1 mRNA水平与正常DF-1细胞没有明显差异.本实验结果表明:细胞gga-miR-21可以抑制IBDV的复制,其分子作用机理是在VP1基因翻译水平上实现的.
위연구microRNA(gga-miR-21)대전염성법씨낭병병독(IBDV)복제적영향,본연구이용PCR방법종계적간세포기인조중확증세포pri-gga-miR-21,극륭우만병독표체질립pL-EGFP중구건중조질립pL-miR-21.장pL-miR-21여3개포장질립pLP1、pLP2화pLP/VSVG공전염293FT세포,제비함gga-miR-21기인적중조만병독VL+miR-21.장VL+miR-21감염DF-1세포,경살도온균소사선획득과표체gga-miR-21적세포주DF-miR-21,채용정량RT-PCR(qRT-PCR)검측표명,gga-miR-21적표체량비정상DF-1세포제고60％.장IBDV접충우DF-miR-21세포,재96 h후,기병독적도(104.75 TCID50/0.1 mL)현저저우정상DF-1세포적병독적도(108.75 TCID50/0.1 mL).채용생물신식학방법화쌍형광소매보고계통분석험증,재IBDV기인조VP1기인중존재gga-miR-21적결합파점.장IBDV감염DF-miR-21세포,채용western blot분석,VP1단백적표체량비정상DF-1세포현저강저；용qRT-PCR분석,VP1 mRNA수평여정상DF-1세포몰유명현차이.본실험결과표명:세포gga-miR-21가이억제IBDV적복제,기분자작용궤리시재VP1기인번역수평상실현적.