中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2013年
2期
151-154
,共4页
魏锁成%巩转娣%车团结%田风林
魏鎖成%鞏轉娣%車糰結%田風林
위쇄성%공전제%차단결%전풍림
轮状病毒%VP7基因%实时荧光定量PCR
輪狀病毒%VP7基因%實時熒光定量PCR
륜상병독%VP7기인%실시형광정량PCR
为建立快速特异的定量检测牛轮状病毒(BRV) VP7基因的荧光定量PCR检测方法,本研究设计扩增BRV VP7基因的特异性引物,将扩增的VP7基因片段(342 bp)克隆于pMD 18-T载体中(pMD-VP7),作为重组质粒标准品,建立EvaGreen荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测方法.经反应条件优化,结果表明该方法的最低检测量为8.03拷贝/μL.该方法对牛病毒性腹泻病毒、牛冠状病毒、猪流行性腹泻病毒及牛结核分枝杆菌的检测结果均为阴性,表明其具有良好的特异性.批内和批间重复变异系数均小于3％.采用该方法对12份ELISA阳性样本检测出10份阳性,符合率83.33％.本研究建立的BVR VP7 qRT-PCR检测方法具有特异、灵敏、快速和对标本的检测能力较强等特点,可以用于临床诊断和流行病学调查.
為建立快速特異的定量檢測牛輪狀病毒(BRV) VP7基因的熒光定量PCR檢測方法,本研究設計擴增BRV VP7基因的特異性引物,將擴增的VP7基因片段(342 bp)剋隆于pMD 18-T載體中(pMD-VP7),作為重組質粒標準品,建立EvaGreen熒光定量RT-PCR(qRT-PCR)檢測方法.經反應條件優化,結果錶明該方法的最低檢測量為8.03拷貝/μL.該方法對牛病毒性腹瀉病毒、牛冠狀病毒、豬流行性腹瀉病毒及牛結覈分枝桿菌的檢測結果均為陰性,錶明其具有良好的特異性.批內和批間重複變異繫數均小于3％.採用該方法對12份ELISA暘性樣本檢測齣10份暘性,符閤率83.33％.本研究建立的BVR VP7 qRT-PCR檢測方法具有特異、靈敏、快速和對標本的檢測能力較彊等特點,可以用于臨床診斷和流行病學調查.
위건립쾌속특이적정량검측우륜상병독(BRV) VP7기인적형광정량PCR검측방법,본연구설계확증BRV VP7기인적특이성인물,장확증적VP7기인편단(342 bp)극륭우pMD 18-T재체중(pMD-VP7),작위중조질립표준품,건립EvaGreen형광정량RT-PCR(qRT-PCR)검측방법.경반응조건우화,결과표명해방법적최저검측량위8.03고패/μL.해방법대우병독성복사병독、우관상병독、저류행성복사병독급우결핵분지간균적검측결과균위음성,표명기구유량호적특이성.비내화비간중복변이계수균소우3％.채용해방법대12빈ELISA양성양본검측출10빈양성,부합솔83.33％.본연구건립적BVR VP7 qRT-PCR검측방법구유특이、령민、쾌속화대표본적검측능력교강등특점,가이용우림상진단화류행병학조사.
