中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2013年
2期
146-150
,共5页
孙静%周国辉%王幸%李超斯%魏萍%于力
孫靜%週國輝%王倖%李超斯%魏萍%于力
손정%주국휘%왕행%리초사%위평%우력
A型口蹄疫病毒%单克隆抗体%抗原捕获ELISA
A型口蹄疫病毒%單剋隆抗體%抗原捕穫ELISA
A형구제역병독%단극륭항체%항원포획ELISA
为建立A型口蹄疫病毒(FMDV)病原学诊断方法,本研究应用纯化的A型FMDV免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,筛选获得一株稳定分泌单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞株5F7.经IFA特异性鉴定,5F7为一株血清型特异性MAb.亚类为IgG1/k.间接ELISA检测杂交瘤细胞上清和腹水抗体效价分别为1:12 800和1:105.硫氰酸盐洗脱法测定其相对亲和力常数为1.5 mol/L.应用该A型特异性MAb及实验室已制备的MAb 3D9初步建立了检测A型FMDV的抗原捕获ELISA方法.该方法可以检出2.0 ng纯化FMDV和1.0×104 TCID50病毒,与O型、Asial型FMDV及牛肠道病毒、牛呼肠孤病毒、牛传染性鼻气管炎病毒等均无交叉反应,组内及组间重复性试验显示变异系数小于8％.本研究建立的抗原捕获ELISA方法为A型FMDV抗原检测提供了一种实用有效的技术手段.
為建立A型口蹄疫病毒(FMDV)病原學診斷方法,本研究應用純化的A型FMDV免疫BALB/c小鼠,取其脾細胞與SP2/0細胞融閤,篩選穫得一株穩定分泌單剋隆抗體(MAb)的雜交瘤細胞株5F7.經IFA特異性鑒定,5F7為一株血清型特異性MAb.亞類為IgG1/k.間接ELISA檢測雜交瘤細胞上清和腹水抗體效價分彆為1:12 800和1:105.硫氰痠鹽洗脫法測定其相對親和力常數為1.5 mol/L.應用該A型特異性MAb及實驗室已製備的MAb 3D9初步建立瞭檢測A型FMDV的抗原捕穫ELISA方法.該方法可以檢齣2.0 ng純化FMDV和1.0×104 TCID50病毒,與O型、Asial型FMDV及牛腸道病毒、牛呼腸孤病毒、牛傳染性鼻氣管炎病毒等均無交扠反應,組內及組間重複性試驗顯示變異繫數小于8％.本研究建立的抗原捕穫ELISA方法為A型FMDV抗原檢測提供瞭一種實用有效的技術手段.
위건립A형구제역병독(FMDV)병원학진단방법,본연구응용순화적A형FMDV면역BALB/c소서,취기비세포여SP2/0세포융합,사선획득일주은정분비단극륭항체(MAb)적잡교류세포주5F7.경IFA특이성감정,5F7위일주혈청형특이성MAb.아류위IgG1/k.간접ELISA검측잡교류세포상청화복수항체효개분별위1:12 800화1:105.류청산염세탈법측정기상대친화력상수위1.5 mol/L.응용해A형특이성MAb급실험실이제비적MAb 3D9초보건립료검측A형FMDV적항원포획ELISA방법.해방법가이검출2.0 ng순화FMDV화1.0×104 TCID50병독,여O형、Asial형FMDV급우장도병독、우호장고병독、우전염성비기관염병독등균무교차반응,조내급조간중복성시험현시변이계수소우8％.본연구건립적항원포획ELISA방법위A형FMDV항원검측제공료일충실용유효적기술수단.
