中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2013年
1期
31-35
,共5页
计红%王江璐%张伟宏%郭景茹%杨焕民%柳巨雄%李士泽%孔凡志
計紅%王江璐%張偉宏%郭景茹%楊煥民%柳巨雄%李士澤%孔凡誌
계홍%왕강로%장위굉%곽경여%양환민%류거웅%리사택%공범지
α-烯醇化酶%重组腺病毒%颗粒细胞
α-烯醇化酶%重組腺病毒%顆粒細胞
α-희순화매%중조선병독%과립세포
为构建表达籽鹅α-烯醇化酶(ENO1)基因的重组腺病毒,本研究利用RT-PCR技术,从籽鹅卵巢组织中扩增ENO1基因,克隆至pShuttle-CMV穿梭载体中,并利用I-CeuI与I-SceI将ENO1基因的表达框切下,连接到腺病毒骨架的pAdxsi载体中.采用Pac Ⅰ酶切,将其线性化,并转染至293(R)细胞进行病毒的包装,制备重组腺病毒.实验结果显示,制备的表达ENO1重组腺病毒的滴度达到1.1×1O11 pfu/mL.将重组腺病毒感染籽鹅卵泡颗粒细胞后,荧光定量RT-PCR与western blot检测显示细胞中ENO1基因和蛋白表达水平显著高于正常细胞(p＜0.05),这些结果为研究ENO1生物学活性及功能奠定了基础.
為構建錶達籽鵝α-烯醇化酶(ENO1)基因的重組腺病毒,本研究利用RT-PCR技術,從籽鵝卵巢組織中擴增ENO1基因,剋隆至pShuttle-CMV穿梭載體中,併利用I-CeuI與I-SceI將ENO1基因的錶達框切下,連接到腺病毒骨架的pAdxsi載體中.採用Pac Ⅰ酶切,將其線性化,併轉染至293(R)細胞進行病毒的包裝,製備重組腺病毒.實驗結果顯示,製備的錶達ENO1重組腺病毒的滴度達到1.1×1O11 pfu/mL.將重組腺病毒感染籽鵝卵泡顆粒細胞後,熒光定量RT-PCR與western blot檢測顯示細胞中ENO1基因和蛋白錶達水平顯著高于正常細胞(p＜0.05),這些結果為研究ENO1生物學活性及功能奠定瞭基礎.
위구건표체자아α-희순화매(ENO1)기인적중조선병독,본연구이용RT-PCR기술,종자아란소조직중확증ENO1기인,극륭지pShuttle-CMV천사재체중,병이용I-CeuI여I-SceI장ENO1기인적표체광절하,련접도선병독골가적pAdxsi재체중.채용Pac Ⅰ매절,장기선성화,병전염지293(R)세포진행병독적포장,제비중조선병독.실험결과현시,제비적표체ENO1중조선병독적적도체도1.1×1O11 pfu/mL.장중조선병독감염자아란포과립세포후,형광정량RT-PCR여western blot검측현시세포중ENO1기인화단백표체수평현저고우정상세포(p＜0.05),저사결과위연구ENO1생물학활성급공능전정료기출.
