中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2013年
6期
468-471
,共4页
骆丹%路义鑫%徐义刚%付丽君%张子群
駱丹%路義鑫%徐義剛%付麗君%張子群
락단%로의흠%서의강%부려군%장자군
绵羊肺腺瘤病毒%实时荧光定量PCR%TaqMan探针
綿羊肺腺瘤病毒%實時熒光定量PCR%TaqMan探針
면양폐선류병독%실시형광정량PCR%TaqMan탐침
jaagsiekte sheep retrovirus%real-time PCR%TaqMan probe
为建立绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)实时荧光定量PCR检测方法,本研究根据JSRV的ag基因,选取其保守序列作为检测目的片段,设计并合成相应的引物和TaqMan探针,以自然病例的肺肿瘤组织基因组DNA为模板,经PCR扩增目的基因构建重组质粒pMD-gag,并将其作为阳性标准品,梯度稀释建立标准曲线,得到扩增方程为:y=-0.304x+38.4,扩增效率为100％,线性相关系数为0.999,该方法最低检出量为103拷贝,与其它病原核酸样品无交叉反应,其变异系数在1.374％以内.本研究为快速检测JSRV以及组装检测试剂盒奠定了基础.
為建立綿羊肺腺瘤病毒(JSRV)實時熒光定量PCR檢測方法,本研究根據JSRV的ag基因,選取其保守序列作為檢測目的片段,設計併閤成相應的引物和TaqMan探針,以自然病例的肺腫瘤組織基因組DNA為模闆,經PCR擴增目的基因構建重組質粒pMD-gag,併將其作為暘性標準品,梯度稀釋建立標準麯線,得到擴增方程為:y=-0.304x+38.4,擴增效率為100％,線性相關繫數為0.999,該方法最低檢齣量為103拷貝,與其它病原覈痠樣品無交扠反應,其變異繫數在1.374％以內.本研究為快速檢測JSRV以及組裝檢測試劑盒奠定瞭基礎.
위건립면양폐선류병독(JSRV)실시형광정량PCR검측방법,본연구근거JSRV적ag기인,선취기보수서렬작위검측목적편단,설계병합성상응적인물화TaqMan탐침,이자연병례적폐종류조직기인조DNA위모판,경PCR확증목적기인구건중조질립pMD-gag,병장기작위양성표준품,제도희석건립표준곡선,득도확증방정위:y=-0.304x+38.4,확증효솔위100％,선성상관계수위0.999,해방법최저검출량위103고패,여기타병원핵산양품무교차반응,기변이계수재1.374％이내.본연구위쾌속검측JSRV이급조장검측시제합전정료기출.
