实验与检验医学
實驗與檢驗醫學
실험여검험의학
EXPERIMENTAL AND LABORATORY MEDICINE
2013年
2期
111-114
,共4页
石淙%张长林%简正伟%江梅%闻芳%万腊根
石淙%張長林%簡正偉%江梅%聞芳%萬臘根
석종%장장림%간정위%강매%문방%만석근
定点突变%abl基因%T315I%阳性对照
定點突變%abl基因%T315I%暘性對照
정점돌변%abl기인%T315I%양성대조
目的 利用聚合酶链反应(PCR)定点突变技术构建含人类abl基因第6号外显子片段的野生型及含T315I突变型重组质粒,作为检测abl T315I基因突变的阳性对照和阴性对照标准品.方法 先设计包括突变位点的两对引物,以健康人外周血基因组DNA为模板,扩增获得野生型和突变型abl基因第6号外显子片段,将其插入pSG5M-flag载体质粒中,并将所获重组质粒分别进行酶切与测序鉴定,通过紫外分光光度计检测标本的浓度和纯度.结果 DNA测序表明在预期位点上发生突变,abl基因第315位氨基酸密码子由苏氨酸(Thr)残基突变为异亮氨酸(Ile)残基,所构建abl基因野生型和突变型质粒,经酶切和测序鉴定与目的片段完全一致.结论 PCR技术诱导定点突变准确、高效.所构建含野生型和T315I突变的abl基因重组质粒,可为检测abl基因T315I突变提供阴性和阳性对照以及质控品,同时也为T315I突变的相关研究奠定了基础.
目的 利用聚閤酶鏈反應(PCR)定點突變技術構建含人類abl基因第6號外顯子片段的野生型及含T315I突變型重組質粒,作為檢測abl T315I基因突變的暘性對照和陰性對照標準品.方法 先設計包括突變位點的兩對引物,以健康人外週血基因組DNA為模闆,擴增穫得野生型和突變型abl基因第6號外顯子片段,將其插入pSG5M-flag載體質粒中,併將所穫重組質粒分彆進行酶切與測序鑒定,通過紫外分光光度計檢測標本的濃度和純度.結果 DNA測序錶明在預期位點上髮生突變,abl基因第315位氨基痠密碼子由囌氨痠(Thr)殘基突變為異亮氨痠(Ile)殘基,所構建abl基因野生型和突變型質粒,經酶切和測序鑒定與目的片段完全一緻.結論 PCR技術誘導定點突變準確、高效.所構建含野生型和T315I突變的abl基因重組質粒,可為檢測abl基因T315I突變提供陰性和暘性對照以及質控品,同時也為T315I突變的相關研究奠定瞭基礎.
목적 이용취합매련반응(PCR)정점돌변기술구건함인류abl기인제6호외현자편단적야생형급함T315I돌변형중조질립,작위검측abl T315I기인돌변적양성대조화음성대조표준품.방법 선설계포괄돌변위점적량대인물,이건강인외주혈기인조DNA위모판,확증획득야생형화돌변형abl기인제6호외현자편단,장기삽입pSG5M-flag재체질립중,병장소획중조질립분별진행매절여측서감정,통과자외분광광도계검측표본적농도화순도.결과 DNA측서표명재예기위점상발생돌변,abl기인제315위안기산밀마자유소안산(Thr)잔기돌변위이량안산(Ile)잔기,소구건abl기인야생형화돌변형질립,경매절화측서감정여목적편단완전일치.결론 PCR기술유도정점돌변준학、고효.소구건함야생형화T315I돌변적abl기인중조질립,가위검측abl기인T315I돌변제공음성화양성대조이급질공품,동시야위T315I돌변적상관연구전정료기출.
