激光杂志
激光雜誌
격광잡지
LASER JOURNAL
2013年
3期
94-96
,共3页
汪先桃%郭变琴%梁勤东%涂植光
汪先桃%郭變琴%樑勤東%塗植光
왕선도%곽변금%량근동%도식광
HULC%lncRNA%实时荧光定量PCR%肝癌
HULC%lncRNA%實時熒光定量PCR%肝癌
HULC%lncRNA%실시형광정량PCR%간암
HULC%lncRNA%real-time fluorescence quantitative PCR%liver cancer
目的:建立实时荧光定量PCR检测长链非编码RNA HULC的方法,探讨其在作为肝癌标志的应用价值.方法:根据Genebank中的HULC lncRNA(AY914050.1)全序列,设计HULC基因的特异引物,构建HULC基因的T克隆载体,命名为pMD18-T-HULC;以pMD18-T-HULC为实时荧光定量PCR检测HULC的标准品,建立实时荧光定量PCR检测HULC的方法并进行方法学评价.应用此方法检测8种肿瘤细胞株、肝癌组织、其它癌及癌旁组织中HULC lncRNA的表达.结果:HULC实时荧光定量PCR检测方法学的最低检测限为1.8× 103拷贝/L,线性范围为1.8× 103拷贝/L至4.6× 109拷贝/L;该法的批内变异系数(CV)＜2.0％,批间CV＜ 8.0％.其在肝癌组织和肝癌细胞株起始表达量为(7.6±3.1)×105拷贝/L至(5.6±3.2)×106拷贝/L,明显高于其它癌和癌旁组织HULC lncRNA表达量(＜1.8×103拷贝/L).新发现膀胱癌细胞株T24中表达量高[(6.7±2.4)×105拷贝/L],但在膀胱癌组织中表达低(＜1.8×103拷贝/L).结论:成功建立了实时荧光定量PCR检测HULC lncRNA的方法,HULC lcRNA可望作为肝癌的标志.
目的:建立實時熒光定量PCR檢測長鏈非編碼RNA HULC的方法,探討其在作為肝癌標誌的應用價值.方法:根據Genebank中的HULC lncRNA(AY914050.1)全序列,設計HULC基因的特異引物,構建HULC基因的T剋隆載體,命名為pMD18-T-HULC;以pMD18-T-HULC為實時熒光定量PCR檢測HULC的標準品,建立實時熒光定量PCR檢測HULC的方法併進行方法學評價.應用此方法檢測8種腫瘤細胞株、肝癌組織、其它癌及癌徬組織中HULC lncRNA的錶達.結果:HULC實時熒光定量PCR檢測方法學的最低檢測限為1.8× 103拷貝/L,線性範圍為1.8× 103拷貝/L至4.6× 109拷貝/L;該法的批內變異繫數(CV)＜2.0％,批間CV＜ 8.0％.其在肝癌組織和肝癌細胞株起始錶達量為(7.6±3.1)×105拷貝/L至(5.6±3.2)×106拷貝/L,明顯高于其它癌和癌徬組織HULC lncRNA錶達量(＜1.8×103拷貝/L).新髮現膀胱癌細胞株T24中錶達量高[(6.7±2.4)×105拷貝/L],但在膀胱癌組織中錶達低(＜1.8×103拷貝/L).結論:成功建立瞭實時熒光定量PCR檢測HULC lncRNA的方法,HULC lcRNA可望作為肝癌的標誌.
목적:건립실시형광정량PCR검측장련비편마RNA HULC적방법,탐토기재작위간암표지적응용개치.방법:근거Genebank중적HULC lncRNA(AY914050.1)전서렬,설계HULC기인적특이인물,구건HULC기인적T극륭재체,명명위pMD18-T-HULC;이pMD18-T-HULC위실시형광정량PCR검측HULC적표준품,건립실시형광정량PCR검측HULC적방법병진행방법학평개.응용차방법검측8충종류세포주、간암조직、기타암급암방조직중HULC lncRNA적표체.결과:HULC실시형광정량PCR검측방법학적최저검측한위1.8× 103고패/L,선성범위위1.8× 103고패/L지4.6× 109고패/L;해법적비내변이계수(CV)＜2.0％,비간CV＜ 8.0％.기재간암조직화간암세포주기시표체량위(7.6±3.1)×105고패/L지(5.6±3.2)×106고패/L,명현고우기타암화암방조직HULC lncRNA표체량(＜1.8×103고패/L).신발현방광암세포주T24중표체량고[(6.7±2.4)×105고패/L],단재방광암조직중표체저(＜1.8×103고패/L).결론:성공건립료실시형광정량PCR검측HULC lncRNA적방법,HULC lcRNA가망작위간암적표지.
