光谱学与光谱分析
光譜學與光譜分析
광보학여광보분석
SPECTROSCOPY AND SPECTRAL ANALYSIS
2013年
7期
1749-1753
,共5页
蛋白酶K%热稳定性%稳态荧光光谱%瞬态荧光光谱%圆二色谱
蛋白酶K%熱穩定性%穩態熒光光譜%瞬態熒光光譜%圓二色譜
단백매K%열은정성%은태형광광보%순태형광광보%원이색보
Proteinase K%Thermal stability%Steady-state fluorescence%Time-resolved fluorescence%Circular dichroism
用不同温度处理蛋白酶K,以变性酪蛋白底物法测定酶活力,稳态/瞬态荧光光谱法和圆二色谱法测定空间构象和二级结构,研究温度对蛋白酶K酶活力和构象的影响.温度由25℃升高至65℃过程中,蛋白酶K的酶活力逐渐降低,半衰期缩短；发射光谱荧光强度降低,峰位由335 nm红移至354 nm;色氨酸残基同步荧光强度降低,酪氨酸残基同步荧光强度增大；色氨酸残基荧光寿命由4.4271 ns降低至4.0324ns;α-螺旋百分含量降低.结果表明:采用稳态/瞬态荧光光谱法和圆二色谱法能较简便、准确的描述蛋白酶K的热稳定性变化；蛋白酶K的热变性过程符合三态模型,存在一个中间态；蛋白酶K分子内部存在酪氨酸残基对色氨酸残基的共振能量转移作用；α-螺旋是维系蛋白酶K活性中心构象稳定性的主要结构.
用不同溫度處理蛋白酶K,以變性酪蛋白底物法測定酶活力,穩態/瞬態熒光光譜法和圓二色譜法測定空間構象和二級結構,研究溫度對蛋白酶K酶活力和構象的影響.溫度由25℃升高至65℃過程中,蛋白酶K的酶活力逐漸降低,半衰期縮短；髮射光譜熒光彊度降低,峰位由335 nm紅移至354 nm;色氨痠殘基同步熒光彊度降低,酪氨痠殘基同步熒光彊度增大；色氨痠殘基熒光壽命由4.4271 ns降低至4.0324ns;α-螺鏇百分含量降低.結果錶明:採用穩態/瞬態熒光光譜法和圓二色譜法能較簡便、準確的描述蛋白酶K的熱穩定性變化；蛋白酶K的熱變性過程符閤三態模型,存在一箇中間態；蛋白酶K分子內部存在酪氨痠殘基對色氨痠殘基的共振能量轉移作用；α-螺鏇是維繫蛋白酶K活性中心構象穩定性的主要結構.
용불동온도처리단백매K,이변성락단백저물법측정매활력,은태/순태형광광보법화원이색보법측정공간구상화이급결구,연구온도대단백매K매활력화구상적영향.온도유25℃승고지65℃과정중,단백매K적매활력축점강저,반쇠기축단；발사광보형광강도강저,봉위유335 nm홍이지354 nm;색안산잔기동보형광강도강저,락안산잔기동보형광강도증대；색안산잔기형광수명유4.4271 ns강저지4.0324ns;α-라선백분함량강저.결과표명:채용은태/순태형광광보법화원이색보법능교간편、준학적묘술단백매K적열은정성변화；단백매K적열변성과정부합삼태모형,존재일개중간태；단백매K분자내부존재락안산잔기대색안산잔기적공진능량전이작용；α-라선시유계단백매K활성중심구상은정성적주요결구.
