河南农业大学学报
河南農業大學學報
하남농업대학학보
ACTA AGRICULTURAE UNIVERSITATIS HENANENSIS
2013年
3期
268-271,288
,共5页
白润娥%邓利%曹玲珑%李冬兵%熊大斌%牛洪斌%尹钧
白潤娥%鄧利%曹玲瓏%李鼕兵%熊大斌%牛洪斌%尹鈞
백윤아%산리%조령롱%리동병%웅대빈%우홍빈%윤균
马铃薯%甾醇异构酶%原核表达
馬鈴藷%甾醇異構酶%原覈錶達
마령서%치순이구매%원핵표체
potato%StS(I1)%prokaryotic expression
为研究甾醇异构酶的功能以及制备抗体,分别构建了马铃薯C-8,7甾醇异构酶基因StSH携带和去除信号肽序列的原核表达载体pGEX-StSI1b和pGEX-StSI1c,并在大肠杆菌BL21(DE3)工程菌株中优化了融合蛋白GST-StSI1b和GST-StSI1c的诱导表达条件.结果表明,在0.1,0.5,1.0 mmol·L-1的IPTG诱导下,2种融合蛋白GST-StSI1b和GST-StSI1 c均能有效表达,并以1.0 mmol·L-1IPTG诱导的效果最好；从诱导表达的时间来看,3种浓度IPTG诱导3h后融合蛋白均开始表达,且表达量随着诱导时间的延长而逐渐增加,但在诱导9h后的表达量增加幅度不大,因此确定诱导融合蛋白GST-pStSI1表达的最佳IPTG浓度为1.0 mmol·L-1,诱导时间为9h.
為研究甾醇異構酶的功能以及製備抗體,分彆構建瞭馬鈴藷C-8,7甾醇異構酶基因StSH攜帶和去除信號肽序列的原覈錶達載體pGEX-StSI1b和pGEX-StSI1c,併在大腸桿菌BL21(DE3)工程菌株中優化瞭融閤蛋白GST-StSI1b和GST-StSI1c的誘導錶達條件.結果錶明,在0.1,0.5,1.0 mmol·L-1的IPTG誘導下,2種融閤蛋白GST-StSI1b和GST-StSI1 c均能有效錶達,併以1.0 mmol·L-1IPTG誘導的效果最好；從誘導錶達的時間來看,3種濃度IPTG誘導3h後融閤蛋白均開始錶達,且錶達量隨著誘導時間的延長而逐漸增加,但在誘導9h後的錶達量增加幅度不大,因此確定誘導融閤蛋白GST-pStSI1錶達的最佳IPTG濃度為1.0 mmol·L-1,誘導時間為9h.
위연구치순이구매적공능이급제비항체,분별구건료마령서C-8,7치순이구매기인StSH휴대화거제신호태서렬적원핵표체재체pGEX-StSI1b화pGEX-StSI1c,병재대장간균BL21(DE3)공정균주중우화료융합단백GST-StSI1b화GST-StSI1c적유도표체조건.결과표명,재0.1,0.5,1.0 mmol·L-1적IPTG유도하,2충융합단백GST-StSI1b화GST-StSI1 c균능유효표체,병이1.0 mmol·L-1IPTG유도적효과최호；종유도표체적시간래간,3충농도IPTG유도3h후융합단백균개시표체,차표체량수착유도시간적연장이축점증가,단재유도9h후적표체량증가폭도불대,인차학정유도융합단백GST-pStSI1표체적최가IPTG농도위1.0 mmol·L-1,유도시간위9h.
