CAJ | 학술논문

　　目的：克隆人Lumican基因及构建Lumican基因真核表达载体并研究其对人子宫内膜癌细胞HEC-1A增殖的影响。方法：取人新鲜正常子宫内膜组织，提取总RNA，采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）扩增Lumican基因，将该基因定向克隆到真核表达载体pEGFP-N1中，构建真核细胞表达载体pEGFP-N1-Lumican，用限制性内切酶酶切分析，DNA序列分析鉴定重组质粒；将测序正确的Lumican基因通过脂质体介导下转染人子宫内膜癌细胞HEC-1A；逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western Blot 检测转染细胞HEC-1A的Lumican mRNA和蛋白表达。采用MTT法观察转染Lumican基因的人子宫内膜癌细胞HEC-1A的增殖能力。结果：重组质粒pEGFP-N1-Lumican经HindⅢ和BamHⅠ酶切，获得8311 bp片段和865 bp插入片段，序列分析表明插入的片段与Gene Bank发布的序列一致；荧光显微镜下可见转染的HEC-1A细胞有绿色荧光蛋白的表达；转染细胞HEC-1A的Lumican mRNA表达上调，Lumican蛋白相对上调率为74．62％（P＜0．05）。与对照组细胞比较，转染Lumican 基因的人子宫内膜癌细胞HEC-1A的抑制率为21．35％±2．78％。结论：成功构建了真核表达载体pEGFP-N1-Lumican，该载体在体外能有效抑制人子宫内膜癌细胞HEC-1A的增殖能力，为以Lumican基因为靶点研究其对人子宫内膜癌细胞HEC-1A的恶性生物学特性提供实验基础。
　　목적：극륭인Lumican기인급구건Lumican기인진핵표체재체병연구기대인자궁내막암세포HEC-1A증식적영향。방법：취인신선정상자궁내막조직，제취총RNA，채용역전록-취합매련반응（RT-PCR）확증Lumican기인，장해기인정향극륭도진핵표체재체pEGFP-N1중，구건진핵세포표체재체pEGFP-N1-Lumican，용한제성내절매매절분석，DNA서렬분석감정중조질립；장측서정학적Lumican기인통과지질체개도하전염인자궁내막암세포HEC-1A；역전록-취합매련반응（RT-PCR）화Western Blot 검측전염세포HEC-1A적Lumican mRNA화단백표체。채용MTT법관찰전염Lumican기인적인자궁내막암세포HEC-1A적증식능력。결과：중조질립pEGFP-N1-Lumican경HindⅢ화BamHⅠ매절，획득8311 bp편단화865 bp삽입편단，서렬분석표명삽입적편단여Gene Bank발포적서렬일치；형광현미경하가견전염적HEC-1A세포유록색형광단백적표체；전염세포HEC-1A적Lumican mRNA표체상조，Lumican단백상대상조솔위74．62％（P＜0．05）。여대조조세포비교，전염Lumican 기인적인자궁내막암세포HEC-1A적억제솔위21．35％±2．78％。결론：성공구건료진핵표체재체pEGFP-N1-Lumican，해재체재체외능유효억제인자궁내막암세포HEC-1A적증식능력，위이Lumican기인위파점연구기대인자궁내막암세포HEC-1A적악성생물학특성제공실험기출。