中华细胞与干细胞杂志（电子版）
中華細胞與榦細胞雜誌（電子版）
중화세포여간세포잡지（전자판）
CHINESE JOURNAL OF CELL AND STEM CELL
2012年
4期
231-236
,共6页
蔡学敏%朱向情%刘凌%佟晓娜%何洁%马丽花%潘兴华
蔡學敏%硃嚮情%劉凌%佟曉娜%何潔%馬麗花%潘興華
채학민%주향정%류릉%동효나%하길%마려화%반흥화
树突细胞%粒细胞巨噬细胞集落刺激因子%白细胞介素4
樹突細胞%粒細胞巨噬細胞集落刺激因子%白細胞介素4
수돌세포%립세포거서세포집락자격인자%백세포개소4
目的 探讨人外周血来源单个核细胞诱导为树突状细胞(DC)的方法,并对诱导细胞进行活性测定.方法 采用淋巴细胞分离液分离人外周血单个核细胞,然后加入100 ng/ml 人粒- 巨噬细胞集落刺激因子和30 ng/ml 人白细胞介素4 培养5 d,隔天半量换液,补充半量的细胞因子,于第5、6 天,每孔加入1000 U/ml 肿瘤坏死因子,于培养第7 天收集悬浮细胞.倒置显微镜每天观察细胞生长情况,用CD1a 和CD83 通过流式细胞仪和免疫荧光染色检测细胞表面表型,把DC 与T 细胞混合培养,按1:1、1:2、1:5 的比例加入T 淋巴细胞,MTT 法检测T 细胞的增殖活性.采用单因素方差分析,分析各实验组与对照组的细胞表型差异和刺激T 淋巴细胞增殖活性能力比较.结果 培养7 d 即可得到大量DC,显微镜下可见细胞体积增大、数量增多、形态不规则、表面大量突起,为典型的DC 特征,免疫荧光染色可以看到CD1a 和CD83 高表达,培养4 d,流式细胞检测显示CD1a 阳性表达率达80.80 ﹪,CD83 阳性表达率达19.5 ﹪,CD1a 和CD83 双阳性细胞达16.9 ﹪,3 组表达阳性率间比较,差异均有统计学意义(F = 695.293,P < 0.01).同时能刺激T 细胞的增殖反应,其中DC 数与T 细胞数比为1:1 时的刺激增强作用最强,吸光度值为0.74,活性比对照组增加3 倍,差异有统计学意义(P 值均< 0.05).结论 通过体外添加细胞因子,成功诱导外周血单个核细胞为DC.
目的 探討人外週血來源單箇覈細胞誘導為樹突狀細胞(DC)的方法,併對誘導細胞進行活性測定.方法 採用淋巴細胞分離液分離人外週血單箇覈細胞,然後加入100 ng/ml 人粒- 巨噬細胞集落刺激因子和30 ng/ml 人白細胞介素4 培養5 d,隔天半量換液,補充半量的細胞因子,于第5、6 天,每孔加入1000 U/ml 腫瘤壞死因子,于培養第7 天收集懸浮細胞.倒置顯微鏡每天觀察細胞生長情況,用CD1a 和CD83 通過流式細胞儀和免疫熒光染色檢測細胞錶麵錶型,把DC 與T 細胞混閤培養,按1:1、1:2、1:5 的比例加入T 淋巴細胞,MTT 法檢測T 細胞的增殖活性.採用單因素方差分析,分析各實驗組與對照組的細胞錶型差異和刺激T 淋巴細胞增殖活性能力比較.結果 培養7 d 即可得到大量DC,顯微鏡下可見細胞體積增大、數量增多、形態不規則、錶麵大量突起,為典型的DC 特徵,免疫熒光染色可以看到CD1a 和CD83 高錶達,培養4 d,流式細胞檢測顯示CD1a 暘性錶達率達80.80 ﹪,CD83 暘性錶達率達19.5 ﹪,CD1a 和CD83 雙暘性細胞達16.9 ﹪,3 組錶達暘性率間比較,差異均有統計學意義(F = 695.293,P < 0.01).同時能刺激T 細胞的增殖反應,其中DC 數與T 細胞數比為1:1 時的刺激增彊作用最彊,吸光度值為0.74,活性比對照組增加3 倍,差異有統計學意義(P 值均< 0.05).結論 通過體外添加細胞因子,成功誘導外週血單箇覈細胞為DC.
목적 탐토인외주혈래원단개핵세포유도위수돌상세포(DC)적방법,병대유도세포진행활성측정.방법 채용림파세포분리액분리인외주혈단개핵세포,연후가입100 ng/ml 인립- 거서세포집락자격인자화30 ng/ml 인백세포개소4 배양5 d,격천반량환액,보충반량적세포인자,우제5、6 천,매공가입1000 U/ml 종류배사인자,우배양제7 천수집현부세포.도치현미경매천관찰세포생장정황,용CD1a 화CD83 통과류식세포의화면역형광염색검측세포표면표형,파DC 여T 세포혼합배양,안1:1、1:2、1:5 적비례가입T 림파세포,MTT 법검측T 세포적증식활성.채용단인소방차분석,분석각실험조여대조조적세포표형차이화자격T 림파세포증식활성능력비교.결과 배양7 d 즉가득도대량DC,현미경하가견세포체적증대、수량증다、형태불규칙、표면대량돌기,위전형적DC 특정,면역형광염색가이간도CD1a 화CD83 고표체,배양4 d,류식세포검측현시CD1a 양성표체솔체80.80 ﹪,CD83 양성표체솔체19.5 ﹪,CD1a 화CD83 쌍양성세포체16.9 ﹪,3 조표체양성솔간비교,차이균유통계학의의(F = 695.293,P < 0.01).동시능자격T 세포적증식반응,기중DC 수여T 세포수비위1:1 시적자격증강작용최강,흡광도치위0.74,활성비대조조증가3 배,차이유통계학의의(P 치균< 0.05).결론 통과체외첨가세포인자,성공유도외주혈단개핵세포위DC.
