中华消化病与影像杂志（电子版）
中華消化病與影像雜誌（電子版）
중화소화병여영상잡지（전자판）
2013年
2期
28-33
,共6页
张斌%杨卉%肖煜东%秦燕%周顺科
張斌%楊卉%肖煜東%秦燕%週順科
장빈%양훼%초욱동%진연%주순과
HeLa细胞%受体,转铁蛋白%质粒%逆转录聚合酶链反应%分子影像学
HeLa細胞%受體,轉鐵蛋白%質粒%逆轉錄聚閤酶鏈反應%分子影像學
HeLa세포%수체,전철단백%질립%역전록취합매련반응%분자영상학
目的 运用人转铁蛋白受体(hTfR)作为MR报告基因,制作包含hTfR蛋白编码区的表达质粒,并对其进行检测鉴定,为下一步体外、体内MR分子影像研究打下基础.方法 通过脂质体介导的基因转染构建过量表达hTfR的Hela细胞系,以pCDNA3.1 (+)-hTfR为实验组,转染空白质粒pCDNA3.1 (+)为对照组,运用PCR及Westen-Blot的方法在基因水平和蛋白水平检测hTfR在转染前后的表达水平,鉴定转染效果.结果 以pOTB7-TFRC质粒为模板,运用RT-PCR的方法进行hTfR基因编码区的扩展,成功构建了pCDNA3.1(+)-hTfR高表达质粒,测序鉴定正确;通过脂质体转染Hela细胞,瞬时转染效率约70%;RT-PCR显示转染pCDNA3.1(+)-hTfR质粒组较对照组生成的hTfR mRNA明显增高(1.179±0.047 vs.0.260,t=16.8,P＞0.05);Western-Bolt显示转染组较对照组编码的TfR蛋白明显增高(0.648±0.025 vs.0.333,t=10.8,P＜0.05).结论 成功构建了pCDNA3.1(+)-hTfR表达质粒;质粒转染Hela细胞后表达的hTfR mRNA及hTfR蛋白均明显增高;为下一步分子影像学的实验奠定了基础.
目的 運用人轉鐵蛋白受體(hTfR)作為MR報告基因,製作包含hTfR蛋白編碼區的錶達質粒,併對其進行檢測鑒定,為下一步體外、體內MR分子影像研究打下基礎.方法 通過脂質體介導的基因轉染構建過量錶達hTfR的Hela細胞繫,以pCDNA3.1 (+)-hTfR為實驗組,轉染空白質粒pCDNA3.1 (+)為對照組,運用PCR及Westen-Blot的方法在基因水平和蛋白水平檢測hTfR在轉染前後的錶達水平,鑒定轉染效果.結果 以pOTB7-TFRC質粒為模闆,運用RT-PCR的方法進行hTfR基因編碼區的擴展,成功構建瞭pCDNA3.1(+)-hTfR高錶達質粒,測序鑒定正確;通過脂質體轉染Hela細胞,瞬時轉染效率約70%;RT-PCR顯示轉染pCDNA3.1(+)-hTfR質粒組較對照組生成的hTfR mRNA明顯增高(1.179±0.047 vs.0.260,t=16.8,P＞0.05);Western-Bolt顯示轉染組較對照組編碼的TfR蛋白明顯增高(0.648±0.025 vs.0.333,t=10.8,P＜0.05).結論 成功構建瞭pCDNA3.1(+)-hTfR錶達質粒;質粒轉染Hela細胞後錶達的hTfR mRNA及hTfR蛋白均明顯增高;為下一步分子影像學的實驗奠定瞭基礎.
목적 운용인전철단백수체(hTfR)작위MR보고기인,제작포함hTfR단백편마구적표체질립,병대기진행검측감정,위하일보체외、체내MR분자영상연구타하기출.방법 통과지질체개도적기인전염구건과량표체hTfR적Hela세포계,이pCDNA3.1 (+)-hTfR위실험조,전염공백질립pCDNA3.1 (+)위대조조,운용PCR급Westen-Blot적방법재기인수평화단백수평검측hTfR재전염전후적표체수평,감정전염효과.결과 이pOTB7-TFRC질립위모판,운용RT-PCR적방법진행hTfR기인편마구적확전,성공구건료pCDNA3.1(+)-hTfR고표체질립,측서감정정학;통과지질체전염Hela세포,순시전염효솔약70%;RT-PCR현시전염pCDNA3.1(+)-hTfR질립조교대조조생성적hTfR mRNA명현증고(1.179±0.047 vs.0.260,t=16.8,P＞0.05);Western-Bolt현시전염조교대조조편마적TfR단백명현증고(0.648±0.025 vs.0.333,t=10.8,P＜0.05).결론 성공구건료pCDNA3.1(+)-hTfR표체질립;질립전염Hela세포후표체적hTfR mRNA급hTfR단백균명현증고;위하일보분자영상학적실험전정료기출.
