中国药理学与毒理学杂志
中國藥理學與毒理學雜誌
중국약이학여독이학잡지
CHINESE JOURNAL OF PHARMACOLOGY AND TOXICOLOGY
2013年
2期
268-274
,共7页
赵青%任志广%贾砚寒%魏寅祥%李新颖%黎燕%李亚里%彭晖
趙青%任誌廣%賈硯寒%魏寅祥%李新穎%黎燕%李亞裏%彭暉
조청%임지엄%가연한%위인상%리신영%려연%리아리%팽휘
艾洛替尼%卵巢癌%耐药%酪氨酸激酶抑制剂
艾洛替尼%卵巢癌%耐藥%酪氨痠激酶抑製劑
애락체니%란소암%내약%락안산격매억제제
目的 通过体外建立艾洛替尼(Erl)耐药的人浆液性卵巢癌细胞系SKOV3/Erl,并探讨其耐药机制,为卵巢癌靶向性治疗的耐药性研究提供细胞模型及依据.方法 采用逐步递增联合大剂量冲击法诱导细胞,取对数生长期的SKOV3细胞,从Erl 1 μmol·L-1开始处理,以Erl 2,4,8,16和 25 μmol·L-1反复换液传代,最终维持浓度为10 μmol·L-1,共诱导10个月.取SKOV3和SKOV3/Er1细胞,加入不同浓度艾洛替尼、紫杉醇、米托蒽醌、表柔比星、拓扑替康、长春新碱和甲氨蝶呤等药物,作用72 h,磺酰罗丹明B染色法检测耐药倍数.流式细胞术检测SKOV3细胞和SKOV3/Er1细胞的细胞周期.Western印迹法检测Erl刺激对敏感和耐药细胞中表皮生长因子受体(EGFR)相关信号通路产生的变化;流式细胞术检测SKOV3/Er1细胞表面ATP结合盒(ABC)转运蛋白中P糖蛋白(Pgp)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)、乳腺癌耐药蛋白(BCRP)的表达以及Toll样受体4(TLR4)的表达;检测脂多糖(LPS)刺激对紫杉醇耐受的SKOV3/Erl细胞的敏感度.结果 Erl对SKOV3细胞的IC50为(9.54±1.04)μmol·L-1,而对SKOV3/Erl细胞的IC50为(21.63±1.05)μmol·L-1,耐药倍数约为2.26,诱导成功的SKOV3/Erl对紫杉醇、长春新碱、米托蒽醌和甲氨蝶呤的耐药倍数均在3倍以上.与SKOV3细胞相比,SKOV3/Erl 细胞G0/G1期比例上升,S期比例下降,G2/M期几乎无变化.Erl刺激后,与SKOV3细胞相比,SKOV3/Erl细胞中p-HER1,p-ERK与p-AKT水平上调.SKOV3/Erl细胞膜上Pgp,BCRP和MRP1表达有微弱上调,而TLR4显著上调;脂多糖可强烈刺激SKOV3/Erl细胞增殖,并且对紫杉醇杀伤起到保护作用,而亲本细胞则相对不敏感.结论 成功建立了对Erl耐受的人卵巢癌耐药细胞SKOV3/Erl.其表现出的多药耐药机制可能与TLR4蛋白表达上调有关.
目的 通過體外建立艾洛替尼(Erl)耐藥的人漿液性卵巢癌細胞繫SKOV3/Erl,併探討其耐藥機製,為卵巢癌靶嚮性治療的耐藥性研究提供細胞模型及依據.方法 採用逐步遞增聯閤大劑量遲擊法誘導細胞,取對數生長期的SKOV3細胞,從Erl 1 μmol·L-1開始處理,以Erl 2,4,8,16和 25 μmol·L-1反複換液傳代,最終維持濃度為10 μmol·L-1,共誘導10箇月.取SKOV3和SKOV3/Er1細胞,加入不同濃度艾洛替尼、紫杉醇、米託蒽醌、錶柔比星、拓撲替康、長春新堿和甲氨蝶呤等藥物,作用72 h,磺酰囉丹明B染色法檢測耐藥倍數.流式細胞術檢測SKOV3細胞和SKOV3/Er1細胞的細胞週期.Western印跡法檢測Erl刺激對敏感和耐藥細胞中錶皮生長因子受體(EGFR)相關信號通路產生的變化;流式細胞術檢測SKOV3/Er1細胞錶麵ATP結閤盒(ABC)轉運蛋白中P糖蛋白(Pgp)、多藥耐藥相關蛋白1(MRP1)、乳腺癌耐藥蛋白(BCRP)的錶達以及Toll樣受體4(TLR4)的錶達;檢測脂多糖(LPS)刺激對紫杉醇耐受的SKOV3/Erl細胞的敏感度.結果 Erl對SKOV3細胞的IC50為(9.54±1.04)μmol·L-1,而對SKOV3/Erl細胞的IC50為(21.63±1.05)μmol·L-1,耐藥倍數約為2.26,誘導成功的SKOV3/Erl對紫杉醇、長春新堿、米託蒽醌和甲氨蝶呤的耐藥倍數均在3倍以上.與SKOV3細胞相比,SKOV3/Erl 細胞G0/G1期比例上升,S期比例下降,G2/M期幾乎無變化.Erl刺激後,與SKOV3細胞相比,SKOV3/Erl細胞中p-HER1,p-ERK與p-AKT水平上調.SKOV3/Erl細胞膜上Pgp,BCRP和MRP1錶達有微弱上調,而TLR4顯著上調;脂多糖可彊烈刺激SKOV3/Erl細胞增殖,併且對紫杉醇殺傷起到保護作用,而親本細胞則相對不敏感.結論 成功建立瞭對Erl耐受的人卵巢癌耐藥細胞SKOV3/Erl.其錶現齣的多藥耐藥機製可能與TLR4蛋白錶達上調有關.
목적 통과체외건립애락체니(Erl)내약적인장액성란소암세포계SKOV3/Erl,병탐토기내약궤제,위란소암파향성치료적내약성연구제공세포모형급의거.방법 채용축보체증연합대제량충격법유도세포,취대수생장기적SKOV3세포,종Erl 1 μmol·L-1개시처리,이Erl 2,4,8,16화 25 μmol·L-1반복환액전대,최종유지농도위10 μmol·L-1,공유도10개월.취SKOV3화SKOV3/Er1세포,가입불동농도애락체니、자삼순、미탁은곤、표유비성、탁복체강、장춘신감화갑안접령등약물,작용72 h,광선라단명B염색법검측내약배수.류식세포술검측SKOV3세포화SKOV3/Er1세포적세포주기.Western인적법검측Erl자격대민감화내약세포중표피생장인자수체(EGFR)상관신호통로산생적변화;류식세포술검측SKOV3/Er1세포표면ATP결합합(ABC)전운단백중P당단백(Pgp)、다약내약상관단백1(MRP1)、유선암내약단백(BCRP)적표체이급Toll양수체4(TLR4)적표체;검측지다당(LPS)자격대자삼순내수적SKOV3/Erl세포적민감도.결과 Erl대SKOV3세포적IC50위(9.54±1.04)μmol·L-1,이대SKOV3/Erl세포적IC50위(21.63±1.05)μmol·L-1,내약배수약위2.26,유도성공적SKOV3/Erl대자삼순、장춘신감、미탁은곤화갑안접령적내약배수균재3배이상.여SKOV3세포상비,SKOV3/Erl 세포G0/G1기비례상승,S기비례하강,G2/M기궤호무변화.Erl자격후,여SKOV3세포상비,SKOV3/Erl세포중p-HER1,p-ERK여p-AKT수평상조.SKOV3/Erl세포막상Pgp,BCRP화MRP1표체유미약상조,이TLR4현저상조;지다당가강렬자격SKOV3/Erl세포증식,병차대자삼순살상기도보호작용,이친본세포칙상대불민감.결론 성공건립료대Erl내수적인란소암내약세포SKOV3/Erl.기표현출적다약내약궤제가능여TLR4단백표체상조유관.
