中国药理学与毒理学杂志
中國藥理學與毒理學雜誌
중국약이학여독이학잡지
CHINESE JOURNAL OF PHARMACOLOGY AND TOXICOLOGY
2013年
2期
209-215
,共7页
孙飞%唐江琼%郑元斌%秦又发%陈临溪%秦旭平
孫飛%唐江瓊%鄭元斌%秦又髮%陳臨溪%秦旭平
손비%당강경%정원빈%진우발%진림계%진욱평
血管紧张素Ⅱ%降钙素基因相关肽%降钙素受体样受体%受体活性修饰蛋白1
血管緊張素Ⅱ%降鈣素基因相關肽%降鈣素受體樣受體%受體活性脩飾蛋白1
혈관긴장소Ⅱ%강개소기인상관태%강개소수체양수체%수체활성수식단백1
目的 探索受体活性修饰蛋白1(RAMP1)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和(或)降钙素基因相关肽(CGRP)诱导的降钙素受体样受体(CRLR)在血管平滑肌细胞(VSMC)的表达和分布的影响,进一步揭示CGRP抑制VSMC增殖的机制.方法 通过酶切、连接、转化等方法构建pCDNA3.1(+)-RAMP1真核表达载体并稳定转染至鼠源性血管平滑肌细胞株A10中,获得稳定高表达RAMP1的细胞系.无转染细胞、转染空载体[pCDNA3.1(+)]细胞和RAMP1高表达组细胞[pCDNA3.1(+)-RAMP1]分别用AngⅡ 100 nmol·L-1、CGRP 100 nmol·L-1和CGRP+AngⅡ处理24 h,用MTT法检测细胞存活;逆转录PCR、Western印迹和免疫荧光法分别检测CRLR mRNA含量、蛋白表达及细胞膜分布.结果 单纯转染空质粒或RAMP1对细胞增殖无明显影响.AngⅡ处理对3种细胞存活的影响无显著差异.pCDNA3.1(+)-RAMP1细胞经CGRP处理24 h后,细胞存活明显高于其他两组细胞(P<0.05);经CGRP+AngⅡ处理,细胞存活明显低于其他两组(P<0.05).AngⅡ,CGRP和CGRP+AngⅡ处理对3种细胞CRLR mRNA表达无明显影响,但CGRP处理使pCDNA3.1(+)-RAMP1细胞中CRLR蛋白明显高于其他两种细胞(P<0.05),而CGRP+AngⅡ处理使pCDNA3.1(+)-RAMP1细胞中CRLR蛋白明显低于其他两种细胞(P<0.05).免疫荧光结果显示,经无血清或CGRP处理后,无转染细胞和pCDNA3.1(+)细胞中的RAMP1和CRLR主要分布在胞浆区域;经AngⅡ或CGPR+AngⅡ处理后,pCDNA3.1(+)-RAMP1细胞中RAMP1和CRLR在细胞膜上的分布多于无转染细胞和pCDNA3.1(+)细胞.结论 高表达RAMP1能增强CGRP抑制AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞增殖,其机制可能是通过RAMP1增加CRLR的膜分布,从而增强CGRP受体对CGRP的敏感性有关.
目的 探索受體活性脩飾蛋白1(RAMP1)對血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)和(或)降鈣素基因相關肽(CGRP)誘導的降鈣素受體樣受體(CRLR)在血管平滑肌細胞(VSMC)的錶達和分佈的影響,進一步揭示CGRP抑製VSMC增殖的機製.方法 通過酶切、連接、轉化等方法構建pCDNA3.1(+)-RAMP1真覈錶達載體併穩定轉染至鼠源性血管平滑肌細胞株A10中,穫得穩定高錶達RAMP1的細胞繫.無轉染細胞、轉染空載體[pCDNA3.1(+)]細胞和RAMP1高錶達組細胞[pCDNA3.1(+)-RAMP1]分彆用AngⅡ 100 nmol·L-1、CGRP 100 nmol·L-1和CGRP+AngⅡ處理24 h,用MTT法檢測細胞存活;逆轉錄PCR、Western印跡和免疫熒光法分彆檢測CRLR mRNA含量、蛋白錶達及細胞膜分佈.結果 單純轉染空質粒或RAMP1對細胞增殖無明顯影響.AngⅡ處理對3種細胞存活的影響無顯著差異.pCDNA3.1(+)-RAMP1細胞經CGRP處理24 h後,細胞存活明顯高于其他兩組細胞(P<0.05);經CGRP+AngⅡ處理,細胞存活明顯低于其他兩組(P<0.05).AngⅡ,CGRP和CGRP+AngⅡ處理對3種細胞CRLR mRNA錶達無明顯影響,但CGRP處理使pCDNA3.1(+)-RAMP1細胞中CRLR蛋白明顯高于其他兩種細胞(P<0.05),而CGRP+AngⅡ處理使pCDNA3.1(+)-RAMP1細胞中CRLR蛋白明顯低于其他兩種細胞(P<0.05).免疫熒光結果顯示,經無血清或CGRP處理後,無轉染細胞和pCDNA3.1(+)細胞中的RAMP1和CRLR主要分佈在胞漿區域;經AngⅡ或CGPR+AngⅡ處理後,pCDNA3.1(+)-RAMP1細胞中RAMP1和CRLR在細胞膜上的分佈多于無轉染細胞和pCDNA3.1(+)細胞.結論 高錶達RAMP1能增彊CGRP抑製AngⅡ誘導的血管平滑肌細胞增殖,其機製可能是通過RAMP1增加CRLR的膜分佈,從而增彊CGRP受體對CGRP的敏感性有關.
목적 탐색수체활성수식단백1(RAMP1)대혈관긴장소Ⅱ(AngⅡ)화(혹)강개소기인상관태(CGRP)유도적강개소수체양수체(CRLR)재혈관평활기세포(VSMC)적표체화분포적영향,진일보게시CGRP억제VSMC증식적궤제.방법 통과매절、련접、전화등방법구건pCDNA3.1(+)-RAMP1진핵표체재체병은정전염지서원성혈관평활기세포주A10중,획득은정고표체RAMP1적세포계.무전염세포、전염공재체[pCDNA3.1(+)]세포화RAMP1고표체조세포[pCDNA3.1(+)-RAMP1]분별용AngⅡ 100 nmol·L-1、CGRP 100 nmol·L-1화CGRP+AngⅡ처리24 h,용MTT법검측세포존활;역전록PCR、Western인적화면역형광법분별검측CRLR mRNA함량、단백표체급세포막분포.결과 단순전염공질립혹RAMP1대세포증식무명현영향.AngⅡ처리대3충세포존활적영향무현저차이.pCDNA3.1(+)-RAMP1세포경CGRP처리24 h후,세포존활명현고우기타량조세포(P<0.05);경CGRP+AngⅡ처리,세포존활명현저우기타량조(P<0.05).AngⅡ,CGRP화CGRP+AngⅡ처리대3충세포CRLR mRNA표체무명현영향,단CGRP처리사pCDNA3.1(+)-RAMP1세포중CRLR단백명현고우기타량충세포(P<0.05),이CGRP+AngⅡ처리사pCDNA3.1(+)-RAMP1세포중CRLR단백명현저우기타량충세포(P<0.05).면역형광결과현시,경무혈청혹CGRP처리후,무전염세포화pCDNA3.1(+)세포중적RAMP1화CRLR주요분포재포장구역;경AngⅡ혹CGPR+AngⅡ처리후,pCDNA3.1(+)-RAMP1세포중RAMP1화CRLR재세포막상적분포다우무전염세포화pCDNA3.1(+)세포.결론 고표체RAMP1능증강CGRP억제AngⅡ유도적혈관평활기세포증식,기궤제가능시통과RAMP1증가CRLR적막분포,종이증강CGRP수체대CGRP적민감성유관.
