农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2014年
5期
621-631
,共11页
转基因水稻%抗除草剂%旁侧序列%事件特异性检测%基因型鉴定
轉基因水稻%抗除草劑%徬側序列%事件特異性檢測%基因型鑒定
전기인수도%항제초제%방측서렬%사건특이성검측%기인형감정
Transgenic rice%Herbicide resistance%Flanking sequence%Event-specific detection%Genotyping
随着越来越多的转基因作物及其产品进入人类生活的各个领域,准确、快速、高效的检测转基因作物及其产品成为转基因研究和安全管理的基本要求.为了建立抗两种除草剂转基因水稻(Oryza sativa)EB7001S的事件特异性检测方法,本研究利用高效热不对称PCR(high efficient thermal asymmetric interlaced PCR,hiTAIL-PCR)和长距离PCR法(long-distance PCR,LD-PCR)扩增获得了转基因水稻EB7001S中外源基因插入位点的旁侧序列,其中:右旁侧序列1515 bp,左旁侧序列1460 bp,外源基因插入水稻基因组第7号染色体第1470725位.以左右旁侧序列为基础,建立了转基因水稻EB7001S的事件特异性定性PCR检测方法,采用该方法可从转基因水稻EB7001S中扩增到458和629 bp的2条特异性目的片段.该方法特异性强、稳定性好、灵敏度高,在模板中掺入EB7001S基因组DNA的量为0.1％时仍能通过普通PCR方法检测出来.以旁侧序列为基础,还建立了能快速、准确鉴定外源基因纯合株系的三引物PCR检测法.这些检测方法的建立,将为转基因水稻EB7001S的利用和检测提供关键技术基础.
隨著越來越多的轉基因作物及其產品進入人類生活的各箇領域,準確、快速、高效的檢測轉基因作物及其產品成為轉基因研究和安全管理的基本要求.為瞭建立抗兩種除草劑轉基因水稻(Oryza sativa)EB7001S的事件特異性檢測方法,本研究利用高效熱不對稱PCR(high efficient thermal asymmetric interlaced PCR,hiTAIL-PCR)和長距離PCR法(long-distance PCR,LD-PCR)擴增穫得瞭轉基因水稻EB7001S中外源基因插入位點的徬側序列,其中:右徬側序列1515 bp,左徬側序列1460 bp,外源基因插入水稻基因組第7號染色體第1470725位.以左右徬側序列為基礎,建立瞭轉基因水稻EB7001S的事件特異性定性PCR檢測方法,採用該方法可從轉基因水稻EB7001S中擴增到458和629 bp的2條特異性目的片段.該方法特異性彊、穩定性好、靈敏度高,在模闆中摻入EB7001S基因組DNA的量為0.1％時仍能通過普通PCR方法檢測齣來.以徬側序列為基礎,還建立瞭能快速、準確鑒定外源基因純閤株繫的三引物PCR檢測法.這些檢測方法的建立,將為轉基因水稻EB7001S的利用和檢測提供關鍵技術基礎.
수착월래월다적전기인작물급기산품진입인류생활적각개영역,준학、쾌속、고효적검측전기인작물급기산품성위전기인연구화안전관리적기본요구.위료건립항량충제초제전기인수도(Oryza sativa)EB7001S적사건특이성검측방법,본연구이용고효열불대칭PCR(high efficient thermal asymmetric interlaced PCR,hiTAIL-PCR)화장거리PCR법(long-distance PCR,LD-PCR)확증획득료전기인수도EB7001S중외원기인삽입위점적방측서렬,기중:우방측서렬1515 bp,좌방측서렬1460 bp,외원기인삽입수도기인조제7호염색체제1470725위.이좌우방측서렬위기출,건립료전기인수도EB7001S적사건특이성정성PCR검측방법,채용해방법가종전기인수도EB7001S중확증도458화629 bp적2조특이성목적편단.해방법특이성강、은정성호、령민도고,재모판중참입EB7001S기인조DNA적량위0.1％시잉능통과보통PCR방법검측출래.이방측서렬위기출,환건립료능쾌속、준학감정외원기인순합주계적삼인물PCR검측법.저사검측방법적건립,장위전기인수도EB7001S적이용화검측제공관건기술기출.
