农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2014年
5期
642-650
,共9页
林杉%陈磊%张文祥%李大全%赵宗胜
林杉%陳磊%張文祥%李大全%趙宗勝
림삼%진뢰%장문상%리대전%조종성
中国美利奴羊%抑制消减杂交%发情%卵巢%cDNA文库
中國美利奴羊%抑製消減雜交%髮情%卵巢%cDNA文庫
중국미리노양%억제소감잡교%발정%란소%cDNA문고
Chinese Merino sheep%Suppression subtractive hybridization%Estrus%Ovary%cDNA library
季节性发情是制约我国绵羊(Ovis aries)产业发展的重要因素之一.母羊卵巢是重要的生殖器官,卵巢组织中周期性特异表达的基因很有可能直接或间接影响母羊的季节性发情.为探讨绵羊季节性发情的分子遗传机制,本研究采用抑制性消减杂交技术构建了发情期发情和未发情中国美利奴羊卵巢组织差异表达的消减cDNA文库.随机取样386个阳性克隆,经PCR鉴定获得有效克隆306个,测序后获得126条非冗余序列;用BLAST在线序列软件与GenBank、GenBank EST等数据库进行同源性序列比较,发现其中有21个未知序列,可能是和中国美利奴羊季节性产羔性状相关的新基因.从文库中选择差异表达的视黄酸受体应答1基因(RARRES1)、胸腺素β4基因(TMSB4X)、翻译延长因子基因(EEF1A1)、前胸腺素α基因(PTMA)以及12号和89号基因,在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、卵巢、输卵管、下丘脑和垂体中对上述6种基因进行组织表达谱分析.结果发现,TMSB4X、PTMA、EEF1A1和12号基因在上述组织中均有表达,而RARRES1和89号基因仅在中国美利奴羊卵巢组织中高表达.为了进一步验证研究结果,对RARRES1、TMSB4X、EEF1A1、PTMA、12号和89号基因进行实时定量PCR检测,结果显示,上述基因在发情中国美利奴羊卵巢组织中的表达量显著高于未发情绵羊.本研究筛选出调控中国美利奴羊季节性繁殖相关的候选基因,为进一步研究卵巢功能与绵羊季节性繁殖相互作用的分子机制提供了基础资料.
季節性髮情是製約我國綿羊(Ovis aries)產業髮展的重要因素之一.母羊卵巢是重要的生殖器官,卵巢組織中週期性特異錶達的基因很有可能直接或間接影響母羊的季節性髮情.為探討綿羊季節性髮情的分子遺傳機製,本研究採用抑製性消減雜交技術構建瞭髮情期髮情和未髮情中國美利奴羊卵巢組織差異錶達的消減cDNA文庫.隨機取樣386箇暘性剋隆,經PCR鑒定穫得有效剋隆306箇,測序後穫得126條非冗餘序列;用BLAST在線序列軟件與GenBank、GenBank EST等數據庫進行同源性序列比較,髮現其中有21箇未知序列,可能是和中國美利奴羊季節性產羔性狀相關的新基因.從文庫中選擇差異錶達的視黃痠受體應答1基因(RARRES1)、胸腺素β4基因(TMSB4X)、翻譯延長因子基因(EEF1A1)、前胸腺素α基因(PTMA)以及12號和89號基因,在心髒、肝髒、脾髒、肺髒、腎髒、卵巢、輸卵管、下丘腦和垂體中對上述6種基因進行組織錶達譜分析.結果髮現,TMSB4X、PTMA、EEF1A1和12號基因在上述組織中均有錶達,而RARRES1和89號基因僅在中國美利奴羊卵巢組織中高錶達.為瞭進一步驗證研究結果,對RARRES1、TMSB4X、EEF1A1、PTMA、12號和89號基因進行實時定量PCR檢測,結果顯示,上述基因在髮情中國美利奴羊卵巢組織中的錶達量顯著高于未髮情綿羊.本研究篩選齣調控中國美利奴羊季節性繁殖相關的候選基因,為進一步研究卵巢功能與綿羊季節性繁殖相互作用的分子機製提供瞭基礎資料.
계절성발정시제약아국면양(Ovis aries)산업발전적중요인소지일.모양란소시중요적생식기관,란소조직중주기성특이표체적기인흔유가능직접혹간접영향모양적계절성발정.위탐토면양계절성발정적분자유전궤제,본연구채용억제성소감잡교기술구건료발정기발정화미발정중국미리노양란소조직차이표체적소감cDNA문고.수궤취양386개양성극륭,경PCR감정획득유효극륭306개,측서후획득126조비용여서렬;용BLAST재선서렬연건여GenBank、GenBank EST등수거고진행동원성서렬비교,발현기중유21개미지서렬,가능시화중국미리노양계절성산고성상상관적신기인.종문고중선택차이표체적시황산수체응답1기인(RARRES1)、흉선소β4기인(TMSB4X)、번역연장인자기인(EEF1A1)、전흉선소α기인(PTMA)이급12호화89호기인,재심장、간장、비장、폐장、신장、란소、수란관、하구뇌화수체중대상술6충기인진행조직표체보분석.결과발현,TMSB4X、PTMA、EEF1A1화12호기인재상술조직중균유표체,이RARRES1화89호기인부재중국미리노양란소조직중고표체.위료진일보험증연구결과,대RARRES1、TMSB4X、EEF1A1、PTMA、12호화89호기인진행실시정량PCR검측,결과현시,상술기인재발정중국미리노양란소조직중적표체량현저고우미발정면양.본연구사선출조공중국미리노양계절성번식상관적후선기인,위진일보연구란소공능여면양계절성번식상호작용적분자궤제제공료기출자료.