畜牧与兽医
畜牧與獸醫
축목여수의
ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2013年
1期
25-28
,共4页
牛%犬新孢子虫%NcSRS2-NcGRA7%克隆%生物信息学
牛%犬新孢子蟲%NcSRS2-NcGRA7%剋隆%生物信息學
우%견신포자충%NcSRS2-NcGRA7%극륭%생물신식학
bovine%Neospora caninum%NcSRS2-NcGRA7%cloning%bioinformatics analysis
为了解牛源犬新孢子虫NcSRS2-NcGRA7融合基因的生物学特性,本试验提取牛源犬新孢子虫基因组DNA,应用PCR技术扩增犬新孢子虫表面蛋白基因NcSRS2和致密颗粒蛋白基因NcGRA7,SOE-PCR技术拼接NcSRS2和NcGRA7基因,构建NcSRS2-NcGRA7融合基因重组克隆质粒,并进行PCR鉴定、双酶切鉴定及生物信息学分析.结果,NcSRS2基因扩增片段大小为1 061 bp,NcGRA7基因扩增片段大小为364 bp,NcSRS2-NcGRA7融合基因扩增片段大小为1 482 bp;获得重组克隆质粒pMD18-NcSRS2-NcGRA7经PCR鉴定、双酶切鉴定正确；测序分析表明,与Gen-Bank中已发表的美国株犬新孢子虫(AF061249、AF176649)核苷酸序列同源性为99％；经DNAman等软件分析,预测NcSRS2-NcGRA7融合蛋白抗原指数较高,融合蛋白二级结构以α-螺旋和β-折叠为主,三级结构中2种蛋白独立折叠,并借助Linker互相连接,功能互不影响.本试验为牛源犬新孢子虫NcSRS2-NcGRA7融合蛋白的免疫学研究奠定了基础.
為瞭解牛源犬新孢子蟲NcSRS2-NcGRA7融閤基因的生物學特性,本試驗提取牛源犬新孢子蟲基因組DNA,應用PCR技術擴增犬新孢子蟲錶麵蛋白基因NcSRS2和緻密顆粒蛋白基因NcGRA7,SOE-PCR技術拼接NcSRS2和NcGRA7基因,構建NcSRS2-NcGRA7融閤基因重組剋隆質粒,併進行PCR鑒定、雙酶切鑒定及生物信息學分析.結果,NcSRS2基因擴增片段大小為1 061 bp,NcGRA7基因擴增片段大小為364 bp,NcSRS2-NcGRA7融閤基因擴增片段大小為1 482 bp;穫得重組剋隆質粒pMD18-NcSRS2-NcGRA7經PCR鑒定、雙酶切鑒定正確；測序分析錶明,與Gen-Bank中已髮錶的美國株犬新孢子蟲(AF061249、AF176649)覈苷痠序列同源性為99％；經DNAman等軟件分析,預測NcSRS2-NcGRA7融閤蛋白抗原指數較高,融閤蛋白二級結構以α-螺鏇和β-摺疊為主,三級結構中2種蛋白獨立摺疊,併藉助Linker互相連接,功能互不影響.本試驗為牛源犬新孢子蟲NcSRS2-NcGRA7融閤蛋白的免疫學研究奠定瞭基礎.
위료해우원견신포자충NcSRS2-NcGRA7융합기인적생물학특성,본시험제취우원견신포자충기인조DNA,응용PCR기술확증견신포자충표면단백기인NcSRS2화치밀과립단백기인NcGRA7,SOE-PCR기술병접NcSRS2화NcGRA7기인,구건NcSRS2-NcGRA7융합기인중조극륭질립,병진행PCR감정、쌍매절감정급생물신식학분석.결과,NcSRS2기인확증편단대소위1 061 bp,NcGRA7기인확증편단대소위364 bp,NcSRS2-NcGRA7융합기인확증편단대소위1 482 bp;획득중조극륭질립pMD18-NcSRS2-NcGRA7경PCR감정、쌍매절감정정학；측서분석표명,여Gen-Bank중이발표적미국주견신포자충(AF061249、AF176649)핵감산서렬동원성위99％；경DNAman등연건분석,예측NcSRS2-NcGRA7융합단백항원지수교고,융합단백이급결구이α-라선화β-절첩위주,삼급결구중2충단백독립절첩,병차조Linker호상련접,공능호불영향.본시험위우원견신포자충NcSRS2-NcGRA7융합단백적면역학연구전정료기출.
