CAJ | 학술논문

目的:利用长期冷冻人卵裂期胚胎经序贯共培养形成的囊胚建立人类胚胎干细胞系.方法:将冷冻≥10年的卵裂期胚胎复苏后,采用单层卵丘细胞序贯共培养至囊胚期,经辅助孵出,置鼠胚胎成纤维细胞(MEF)饲养层全胚培养,原代培养6d后加入20％ MEF条件培养基培养至形成原代克隆.观察人胚胎干细胞集落的生长状态并通过碱性磷酸酶染色、Oct-4基因表达、核型分析及体外分化实验等方法进行生物学鉴定.结果:9枚冷冻卵裂期胚胎经序贯共培养,有6枚发育到囊胚期,最终获得1株胚胎干细胞系.经鉴定该细胞系具有碱性磷酸酶活性、表达Oct-4胚胎干细胞特异标记、形成拟胚体、在体外形成具有自动节律性的心肌细胞、并具有46,XY核型等5种特性.结论:冷冻胚胎经序贯共培养能够改善胚胎发育潜能,有助于建立人胚胎干细胞系.
목적:이용장기냉동인란렬기배태경서관공배양형성적낭배건립인류배태간세포계.방법:장냉동≥10년적란렬기배태복소후,채용단층란구세포서관공배양지낭배기,경보조부출,치서배태성섬유세포(MEF)사양층전배배양,원대배양6d후가입20％ MEF조건배양기배양지형성원대극륭.관찰인배태간세포집락적생장상태병통과감성린산매염색、Oct-4기인표체、핵형분석급체외분화실험등방법진행생물학감정.결과:9매냉동란렬기배태경서관공배양,유6매발육도낭배기,최종획득1주배태간세포계.경감정해세포계구유감성린산매활성、표체Oct-4배태간세포특이표기、형성의배체、재체외형성구유자동절률성적심기세포、병구유46,XY핵형등5충특성.결론:냉동배태경서관공배양능구개선배태발육잠능,유조우건립인배태간세포계.