饲料与畜牧·规模养猪
飼料與畜牧·規模養豬
사료여축목·규모양저
siliao yu xum ·guimo yangzhu
2013年
7期
60-64
,共5页
聂兆晶%程福亮%梁瑾%陈甜甜%范群平%谷巍
聶兆晶%程福亮%樑瑾%陳甜甜%範群平%穀巍
섭조정%정복량%량근%진첨첨%범군평%곡외
三重PCR%猪伪狂犬病毒%猪细小病毒%猪圆环病毒2型
三重PCR%豬偽狂犬病毒%豬細小病毒%豬圓環病毒2型
삼중PCR%저위광견병독%저세소병독%저원배병독2형
为了快速、灵敏、准确的鉴定猪伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)、猪细小病毒(Porcine parvoviurs,PPV)、猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2),从而为猪病的预防以及诊断提供依据,根据GenBank上发表的核苷酸序列分别设计了三对能特异性扩增PRV、PPV、PCV2的引物,并成功构建了重组质粒作为阳性对照,经过条件优化后建立了检测PRV、PPV、PCV2的三重PCR检测方法,对试剂盒的特异性、敏感性、重复性和保质期进行研究,并进行了初步的临床验证.试验证明,该检测试剂盒能同时扩增出猪伪狂犬病毒219bp的核苷酸片段,猪圆环病毒2型410bp的核苷酸片段以及猪细小病毒71 1bp的核苷酸片段,并通过在PCR缓冲液中添加5％的DMSO和1M的甜菜碱,减少了非特异性扩增,提高了检测试剂盒的灵敏度.该诊断试剂盒为流行病学的研究以及疾病的诊断提供了简单快速的选择.
為瞭快速、靈敏、準確的鑒定豬偽狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)、豬細小病毒(Porcine parvoviurs,PPV)、豬圓環病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2),從而為豬病的預防以及診斷提供依據,根據GenBank上髮錶的覈苷痠序列分彆設計瞭三對能特異性擴增PRV、PPV、PCV2的引物,併成功構建瞭重組質粒作為暘性對照,經過條件優化後建立瞭檢測PRV、PPV、PCV2的三重PCR檢測方法,對試劑盒的特異性、敏感性、重複性和保質期進行研究,併進行瞭初步的臨床驗證.試驗證明,該檢測試劑盒能同時擴增齣豬偽狂犬病毒219bp的覈苷痠片段,豬圓環病毒2型410bp的覈苷痠片段以及豬細小病毒71 1bp的覈苷痠片段,併通過在PCR緩遲液中添加5％的DMSO和1M的甜菜堿,減少瞭非特異性擴增,提高瞭檢測試劑盒的靈敏度.該診斷試劑盒為流行病學的研究以及疾病的診斷提供瞭簡單快速的選擇.
위료쾌속、령민、준학적감정저위광견병독(Pseudorabies virus,PRV)、저세소병독(Porcine parvoviurs,PPV)、저원배병독2형(Porcine circovirus type 2,PCV2),종이위저병적예방이급진단제공의거,근거GenBank상발표적핵감산서렬분별설계료삼대능특이성확증PRV、PPV、PCV2적인물,병성공구건료중조질립작위양성대조,경과조건우화후건립료검측PRV、PPV、PCV2적삼중PCR검측방법,대시제합적특이성、민감성、중복성화보질기진행연구,병진행료초보적림상험증.시험증명,해검측시제합능동시확증출저위광견병독219bp적핵감산편단,저원배병독2형410bp적핵감산편단이급저세소병독71 1bp적핵감산편단,병통과재PCR완충액중첨가5％적DMSO화1M적첨채감,감소료비특이성확증,제고료검측시제합적령민도.해진단시제합위류행병학적연구이급질병적진단제공료간단쾌속적선택.
