中国实验动物学报
中國實驗動物學報
중국실험동물학보
ACTA LABORATORIUM ANIMALIS SCIENTIA SINICA
2013年
3期
1-6,后插1-后插2
,共7页
徐晓霞%周祁娜%姜涛%王红丽%王欢%季萌%王凌鹏%张广伟%侯月梅
徐曉霞%週祁娜%薑濤%王紅麗%王歡%季萌%王凌鵬%張廣偉%侯月梅
서효하%주기나%강도%왕홍려%왕환%계맹%왕릉붕%장엄위%후월매
转基因%肌浆网钙ATP酶2a%9型腺相关病毒%有效性,毒副作用%大鼠%心肌
轉基因%肌漿網鈣ATP酶2a%9型腺相關病毒%有效性,毒副作用%大鼠%心肌
전기인%기장망개ATP매2a%9형선상관병독%유효성,독부작용%대서%심기
Gene delivery%Sarcoplasmic reticulum Ca2 + ATPase (SERCA) gene%Adeno-associated virus serotype 9 (AAV9)%Efficiency%Toxicity%Rat%Myocardium
目的 研究同一滴度不同心脏基因转染方法转染携带肌浆网钙ATP酶2a(sarcoplasmic reticulum Ca2+ ATPase 2a,SERCA2a)基因的9型腺相关病毒(adeno-associated virus serotype 9,AAV9)即AAV9-SERCA2a对SD大鼠心肌的有效性及对机体毒副作用的影响.方法 体外成功构建AAV9-SERCA2a-EGFP病毒载体系统,90只雄性SD大鼠随机分为尾静脉注射(tail vein injection,TVI)组、心肌注射(intramyocardial injection,IMI)组、心包腔注射(intrapericardial injection,IPI)组,采用相应方法在体分别转染滴度1×1011vg/mL AAV9-SERCA2a-EGFP、AAV9-EGFP、NS各200 μL.转染后30 d,荧光显微镜下观察心肝肾组织绿色荧光表达情况,Western blot检测SERCA2a基因在大鼠各组织的相对表达量,体表12导联心电图检测心律失常发生率,HE染色观察病理学变化,心脏彩色多普勒超声评价心功能,血液生化学指标检测肝肾功能.结果 三组左心室可见大量绿色荧光表达,IMI组荧光局限在注射点,三组肝肾组织均可见微弱荧光；三组心肌SERCA2a蛋白相对表达量显著高于肝肾(P＜0.01),TVI组和IMI组心肌SERCA2a蛋白相对表达量明显高于IPI组(P ＜0.01)；TVI组和IPI组心电图正常,IMI组2只大鼠发生室性早搏；三组转染AAV9-EGFP、AAV9-SERCA2a-EGFP与转染NS相比,心功能、组织病理学、血液生化学指标差异均无显著性(P＞0.05).结论 三种方法转染滴度1 ×1011vg/mL AAV9-SERCA2a基因,TVI法和IMI法在心肌的有效性优于IPI法,TVI法和IPI法对机体的毒副作用小于IMI法,综合三种方法的有效性和毒副作用评价,TVI法优于IMI法和IPI法.
目的 研究同一滴度不同心髒基因轉染方法轉染攜帶肌漿網鈣ATP酶2a(sarcoplasmic reticulum Ca2+ ATPase 2a,SERCA2a)基因的9型腺相關病毒(adeno-associated virus serotype 9,AAV9)即AAV9-SERCA2a對SD大鼠心肌的有效性及對機體毒副作用的影響.方法 體外成功構建AAV9-SERCA2a-EGFP病毒載體繫統,90隻雄性SD大鼠隨機分為尾靜脈註射(tail vein injection,TVI)組、心肌註射(intramyocardial injection,IMI)組、心包腔註射(intrapericardial injection,IPI)組,採用相應方法在體分彆轉染滴度1×1011vg/mL AAV9-SERCA2a-EGFP、AAV9-EGFP、NS各200 μL.轉染後30 d,熒光顯微鏡下觀察心肝腎組織綠色熒光錶達情況,Western blot檢測SERCA2a基因在大鼠各組織的相對錶達量,體錶12導聯心電圖檢測心律失常髮生率,HE染色觀察病理學變化,心髒綵色多普勒超聲評價心功能,血液生化學指標檢測肝腎功能.結果 三組左心室可見大量綠色熒光錶達,IMI組熒光跼限在註射點,三組肝腎組織均可見微弱熒光；三組心肌SERCA2a蛋白相對錶達量顯著高于肝腎(P＜0.01),TVI組和IMI組心肌SERCA2a蛋白相對錶達量明顯高于IPI組(P ＜0.01)；TVI組和IPI組心電圖正常,IMI組2隻大鼠髮生室性早搏；三組轉染AAV9-EGFP、AAV9-SERCA2a-EGFP與轉染NS相比,心功能、組織病理學、血液生化學指標差異均無顯著性(P＞0.05).結論 三種方法轉染滴度1 ×1011vg/mL AAV9-SERCA2a基因,TVI法和IMI法在心肌的有效性優于IPI法,TVI法和IPI法對機體的毒副作用小于IMI法,綜閤三種方法的有效性和毒副作用評價,TVI法優于IMI法和IPI法.
목적 연구동일적도불동심장기인전염방법전염휴대기장망개ATP매2a(sarcoplasmic reticulum Ca2+ ATPase 2a,SERCA2a)기인적9형선상관병독(adeno-associated virus serotype 9,AAV9)즉AAV9-SERCA2a대SD대서심기적유효성급대궤체독부작용적영향.방법 체외성공구건AAV9-SERCA2a-EGFP병독재체계통,90지웅성SD대서수궤분위미정맥주사(tail vein injection,TVI)조、심기주사(intramyocardial injection,IMI)조、심포강주사(intrapericardial injection,IPI)조,채용상응방법재체분별전염적도1×1011vg/mL AAV9-SERCA2a-EGFP、AAV9-EGFP、NS각200 μL.전염후30 d,형광현미경하관찰심간신조직록색형광표체정황,Western blot검측SERCA2a기인재대서각조직적상대표체량,체표12도련심전도검측심률실상발생솔,HE염색관찰병이학변화,심장채색다보륵초성평개심공능,혈액생화학지표검측간신공능.결과 삼조좌심실가견대량록색형광표체,IMI조형광국한재주사점,삼조간신조직균가견미약형광；삼조심기SERCA2a단백상대표체량현저고우간신(P＜0.01),TVI조화IMI조심기SERCA2a단백상대표체량명현고우IPI조(P ＜0.01)；TVI조화IPI조심전도정상,IMI조2지대서발생실성조박；삼조전염AAV9-EGFP、AAV9-SERCA2a-EGFP여전염NS상비,심공능、조직병이학、혈액생화학지표차이균무현저성(P＞0.05).결론 삼충방법전염적도1 ×1011vg/mL AAV9-SERCA2a기인,TVI법화IMI법재심기적유효성우우IPI법,TVI법화IPI법대궤체적독부작용소우IMI법,종합삼충방법적유효성화독부작용평개,TVI법우우IMI법화IPI법.
