耐有机溶剂脂肪酶基因lipI的克隆及其在毕赤酵母中的高效表达
내유궤용제지방매기인lipI적극륭급기재필적효모중적고효표체
Cloning and High-level Expression of Methanol-tolerant Lipase Gene lipI in Pichia pastoris
  • 万方数据
    河南农业科学 하남농업과학
    JOURNAL OF HENAN AGRICULTURAL SCIENCES
    2013年 6期 143-148 ,共6页

    王琰%张志敏%王军%张琨%訾静%万一%王燕%张继生%高建新

    왕염%장지민%왕군%장곤%자정%만일%왕연%장계생%고건신

    耐有机溶剂%脂肪酶基因%毕赤酵母%表达 耐有機溶劑%脂肪酶基因%畢赤酵母%錶達
    내유궤용제%지방매기인%필적효모%표체
    tolerance to organic solvent%lipase gene%Pichia pastoris%expression
    为了实现耐有机溶剂脂肪酶基因的真核表达,参照GenBank公布的脂肪酶基因序列设计简并引物,通过PCR扩增出G.geotrichum SXL-107的全长1 692 bp、编码563个氨基酸的脂肪酶基因lipI,基因登录号为JX074060.利用Signal P 3.0软件对lipI基因序列进行分析,将去除自身信号肽的成熟lipI基因克隆到诱导型表达载体pPIC9K上,构建胞外重组表达载体pPIC9K-lipI,转化毕赤酵母KM71,发酵培养72 h,发酵上清液中脂肪酶活力达到70 U/mL,与野生型脂肪酶产生菌Galactomyces geotrichum SXL-107相比,脂肪酶活力提高7倍.获得的重组脂肪酶的最适温度40℃、pH值为6.5,在10％的甲醇溶液中作用48 h后仍然保持60％以上的酶活力.
    위료실현내유궤용제지방매기인적진핵표체,삼조GenBank공포적지방매기인서렬설계간병인물,통과PCR확증출G.geotrichum SXL-107적전장1 692 bp、편마563개안기산적지방매기인lipI,기인등록호위JX074060.이용Signal P 3.0연건대lipI기인서렬진행분석,장거제자신신호태적성숙lipI기인극륭도유도형표체재체pPIC9K상,구건포외중조표체재체pPIC9K-lipI,전화필적효모KM71,발효배양72 h,발효상청액중지방매활력체도70 U/mL,여야생형지방매산생균Galactomyces geotrichum SXL-107상비,지방매활력제고7배.획득적중조지방매적최괄온도40℃、pH치위6.5,재10％적갑순용액중작용48 h후잉연보지60％이상적매활력.
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