河南农业科学
河南農業科學
하남농업과학
JOURNAL OF HENAN AGRICULTURAL SCIENCES
2013年
6期
85-87,120
,共4页
秦艳红%乔奇%张德胜%田雨婷%王爽%王永江%张振臣
秦豔紅%喬奇%張德勝%田雨婷%王爽%王永江%張振臣
진염홍%교기%장덕성%전우정%왕상%왕영강%장진신
甘薯褪绿矮化病毒%基因克隆%序列分析%外壳蛋白%原核表达
甘藷褪綠矮化病毒%基因剋隆%序列分析%外殼蛋白%原覈錶達
감서퇴록왜화병독%기인극륭%서렬분석%외각단백%원핵표체
sweet potato chlorotic stunt virus%gene cloning%sequence analysis%coat protein%prokaryotic expression
克隆甘薯褪绿矮化病毒(SPCSV)外壳蛋白(CP)基因,构建其原核表达载体,并在大肠杆菌中进行诱导表达.根据已报道的甘薯褪绿矮化病毒西非(WA)株系基因组核苷酸序列设计引物,利用RT-PCR方法克隆了SPCSV四川分离物基因组RNA2上1 902 bp大小的片段.序列分析表明,该片段包括部分p60基因序列、完整的p8基因和CP基因(major CP)序列及部分mCP基因(minor CP)序列.CP基因由774个核苷酸组成,编码257个氨基酸残基,与已发表的SPCSV WA株系Can181-9分离物相比,其核苷酸和氨基酸序列一致性分别为99.48％和99.22％.将CP基因克隆到原核表达载体pET-30a(+)上,SDS-PAGE分析表明,经IPTG诱导,CP基因在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了高效表达,表达的融合蛋白分子量约为38 kD,为SPCSV抗血清的制备及其血清学检测技术的建立奠定了基础.
剋隆甘藷褪綠矮化病毒(SPCSV)外殼蛋白(CP)基因,構建其原覈錶達載體,併在大腸桿菌中進行誘導錶達.根據已報道的甘藷褪綠矮化病毒西非(WA)株繫基因組覈苷痠序列設計引物,利用RT-PCR方法剋隆瞭SPCSV四川分離物基因組RNA2上1 902 bp大小的片段.序列分析錶明,該片段包括部分p60基因序列、完整的p8基因和CP基因(major CP)序列及部分mCP基因(minor CP)序列.CP基因由774箇覈苷痠組成,編碼257箇氨基痠殘基,與已髮錶的SPCSV WA株繫Can181-9分離物相比,其覈苷痠和氨基痠序列一緻性分彆為99.48％和99.22％.將CP基因剋隆到原覈錶達載體pET-30a(+)上,SDS-PAGE分析錶明,經IPTG誘導,CP基因在大腸桿菌BL21(DE3)中穫得瞭高效錶達,錶達的融閤蛋白分子量約為38 kD,為SPCSV抗血清的製備及其血清學檢測技術的建立奠定瞭基礎.
극륭감서퇴록왜화병독(SPCSV)외각단백(CP)기인,구건기원핵표체재체,병재대장간균중진행유도표체.근거이보도적감서퇴록왜화병독서비(WA)주계기인조핵감산서렬설계인물,이용RT-PCR방법극륭료SPCSV사천분리물기인조RNA2상1 902 bp대소적편단.서렬분석표명,해편단포괄부분p60기인서렬、완정적p8기인화CP기인(major CP)서렬급부분mCP기인(minor CP)서렬.CP기인유774개핵감산조성,편마257개안기산잔기,여이발표적SPCSV WA주계Can181-9분리물상비,기핵감산화안기산서렬일치성분별위99.48％화99.22％.장CP기인극륭도원핵표체재체pET-30a(+)상,SDS-PAGE분석표명,경IPTG유도,CP기인재대장간균BL21(DE3)중획득료고효표체,표체적융합단백분자량약위38 kD,위SPCSV항혈청적제비급기혈청학검측기술적건립전정료기출.
