青岛科技大学学报（自然科学版）
青島科技大學學報（自然科學版）
청도과기대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF QINGDAO UNIVERSITY OF SCIENCE AND TECHNOLOGY(NATURAL SCIENCE EDITION)
2013年
3期
244-247
,共4页
刘佳%李张宇%金思岑%邱晓丽
劉佳%李張宇%金思岑%邱曉麗
류가%리장우%금사잠%구효려
人瘦素%毕赤酵母%分泌表达
人瘦素%畢赤酵母%分泌錶達
인수소%필적효모%분비표체
human leptin%Pichia pastoris%secretory expression
将人瘦素成熟蛋白编码序列同义突变成毕赤酵母偏好密码子,人工合成全基因序列.将基因直接连接到pPIC9载体信号肽识别序列之后,构建毕赤酵母真核表达载体pPIC9-hLeptin,电转化毕赤酵母菌株GS115,用PCR法筛选阳性克隆,SDS-PAGE和Western blotting方法筛选能够稳定、高效分泌表达目的蛋白的酵母工程菌.结果表明,成功构建了重组人瘦素毕赤酵母工程菌株,能稳定、高效分泌表达重组人瘦素蛋白,表达量高峰出现在诱导96 h后,摇瓶表达量为200 mg·L-1.
將人瘦素成熟蛋白編碼序列同義突變成畢赤酵母偏好密碼子,人工閤成全基因序列.將基因直接連接到pPIC9載體信號肽識彆序列之後,構建畢赤酵母真覈錶達載體pPIC9-hLeptin,電轉化畢赤酵母菌株GS115,用PCR法篩選暘性剋隆,SDS-PAGE和Western blotting方法篩選能夠穩定、高效分泌錶達目的蛋白的酵母工程菌.結果錶明,成功構建瞭重組人瘦素畢赤酵母工程菌株,能穩定、高效分泌錶達重組人瘦素蛋白,錶達量高峰齣現在誘導96 h後,搖瓶錶達量為200 mg·L-1.
장인수소성숙단백편마서렬동의돌변성필적효모편호밀마자,인공합성전기인서렬.장기인직접련접도pPIC9재체신호태식별서렬지후,구건필적효모진핵표체재체pPIC9-hLeptin,전전화필적효모균주GS115,용PCR법사선양성극륭,SDS-PAGE화Western blotting방법사선능구은정、고효분비표체목적단백적효모공정균.결과표명,성공구건료중조인수소필적효모공정균주,능은정、고효분비표체중조인수소단백,표체량고봉출현재유도96 h후,요병표체량위200 mg·L-1.
