广州医药
廣州醫藥
엄주의약
GUANGZHOU MEDICAL JOURNAL
2013年
4期
1-4
,共4页
容莉莉%杨镒宇%关锐梨%关小珊%邓秋连%谢永强%周珍文
容莉莉%楊鎰宇%關銳梨%關小珊%鄧鞦連%謝永彊%週珍文
용리리%양일우%관예리%관소산%산추련%사영강%주진문
MRSA%CHIPS%克隆%原核表达
MRSA%CHIPS%剋隆%原覈錶達
MRSA%CHIPS%극륭%원핵표체
目的 对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)趋化抑制蛋白(CHIPS)进行扩增、克隆、序列分析、原核表达及纯化,为后续的疫苗研究奠定基础.方法 根据GenBank中趋化抑制蛋白(CHIPS)的序列,设计一对特异性引物,以耐甲氧西林金黄色葡萄球菌DNA为模板PCR扩增CHIPS基因,纯化DNA进行EcoRI、XhoI双酶切鉴定及测序鉴定,并将CHIPS亚克隆入表达载体PET-28α,转化感受态大肠杆菌BL21,对质粒进行双酶切鉴定及基因序列分析,用IPTG诱导表达重组蛋白,His标签单克隆抗体进行免疫印迹验证重组蛋白的表达.结果 以金黄色葡萄球菌临床儿童分离株基因组为模板,成功扩增CHIPS基因,基因大小为450bp；重组PET-28a(+)-CHIPS双酶切鉴定可见目的片段,测序结果显示CHIPS在正确读框中,序列比对分析显示其与相关报道核苷酸序列一致性达99.98％.经IPTG诱导后,pET-28a(+)-CHIPS/BL21在相应分子量(17kDa)可见融合蛋白在上清表达,免疫印迹检测到目的蛋白.结论 成功从儿童分离株MRSA中构建了CHIPS的原核表达系统,并成功在大肠杆菌BL21中融合表达,为后续的疫苗研究奠定基础.
目的 對耐甲氧西林金黃色葡萄毬菌(MRSA)趨化抑製蛋白(CHIPS)進行擴增、剋隆、序列分析、原覈錶達及純化,為後續的疫苗研究奠定基礎.方法 根據GenBank中趨化抑製蛋白(CHIPS)的序列,設計一對特異性引物,以耐甲氧西林金黃色葡萄毬菌DNA為模闆PCR擴增CHIPS基因,純化DNA進行EcoRI、XhoI雙酶切鑒定及測序鑒定,併將CHIPS亞剋隆入錶達載體PET-28α,轉化感受態大腸桿菌BL21,對質粒進行雙酶切鑒定及基因序列分析,用IPTG誘導錶達重組蛋白,His標籤單剋隆抗體進行免疫印跡驗證重組蛋白的錶達.結果 以金黃色葡萄毬菌臨床兒童分離株基因組為模闆,成功擴增CHIPS基因,基因大小為450bp；重組PET-28a(+)-CHIPS雙酶切鑒定可見目的片段,測序結果顯示CHIPS在正確讀框中,序列比對分析顯示其與相關報道覈苷痠序列一緻性達99.98％.經IPTG誘導後,pET-28a(+)-CHIPS/BL21在相應分子量(17kDa)可見融閤蛋白在上清錶達,免疫印跡檢測到目的蛋白.結論 成功從兒童分離株MRSA中構建瞭CHIPS的原覈錶達繫統,併成功在大腸桿菌BL21中融閤錶達,為後續的疫苗研究奠定基礎.
목적 대내갑양서림금황색포도구균(MRSA)추화억제단백(CHIPS)진행확증、극륭、서렬분석、원핵표체급순화,위후속적역묘연구전정기출.방법 근거GenBank중추화억제단백(CHIPS)적서렬,설계일대특이성인물,이내갑양서림금황색포도구균DNA위모판PCR확증CHIPS기인,순화DNA진행EcoRI、XhoI쌍매절감정급측서감정,병장CHIPS아극륭입표체재체PET-28α,전화감수태대장간균BL21,대질립진행쌍매절감정급기인서렬분석,용IPTG유도표체중조단백,His표첨단극륭항체진행면역인적험증중조단백적표체.결과 이금황색포도구균림상인동분리주기인조위모판,성공확증CHIPS기인,기인대소위450bp；중조PET-28a(+)-CHIPS쌍매절감정가견목적편단,측서결과현시CHIPS재정학독광중,서렬비대분석현시기여상관보도핵감산서렬일치성체99.98％.경IPTG유도후,pET-28a(+)-CHIPS/BL21재상응분자량(17kDa)가견융합단백재상청표체,면역인적검측도목적단백.결론 성공종인동분리주MRSA중구건료CHIPS적원핵표체계통,병성공재대장간균BL21중융합표체,위후속적역묘연구전정기출.
