安徽农业科学
安徽農業科學
안휘농업과학
JOURNAL OF ANHUI AGRICULTURAL SCIENCES
2013年
33期
12819-12822
,共4页
严浩%王芳%毛伟平%王文倩%孟素芳%邵峦峦%刘小綪
嚴浩%王芳%毛偉平%王文倩%孟素芳%邵巒巒%劉小綪
엄호%왕방%모위평%왕문천%맹소방%소만만%류소천
ICOSL(可诱导共刺激因子配体)%单链抗体%核糖体展示技术%原核表达
ICOSL(可誘導共刺激因子配體)%單鏈抗體%覈糖體展示技術%原覈錶達
ICOSL(가유도공자격인자배체)%단련항체%핵당체전시기술%원핵표체
ICOS%Sing-chain antibody%Ribosome display%Prokaryotic expression
[目的]构建出鼠源抗ICOSL核糖体展示抗体库.[方法]通过RT-PCR从人B淋巴瘤细胞Daudi的总RNA中扩增出ICOSL胞外区基因,并将此基因插入到原核表达载体pET28a中进行表达.以表达纯化的ICOSL蛋白为抗原免疫Balb/c小鼠,取小鼠脾脏提取总RNA,通过RT-PCR扩增小鼠的重链可变区和Linker(VH-linker)序列,以及轻链可变区和Linker(Vκ-linker)序列.经重组PCR将两段基因连接起来,将VH/κ与pMD19-T载体链接产物转化E.coli DH 5α,PCR鉴定并测序.[结果]VH和κ链得到正确的扩增,长度分别为421和689 bp,VH/κ连接产物正确,连接产物长度为1079 bp.[结论]所采用的引物及反应条件能够扩增出目的基因,成功构建了鼠源抗ICOSL核糖体展示抗体库,为进行核糖体展示体外筛选抗ICOSL特异性单链抗体奠定基础.
[目的]構建齣鼠源抗ICOSL覈糖體展示抗體庫.[方法]通過RT-PCR從人B淋巴瘤細胞Daudi的總RNA中擴增齣ICOSL胞外區基因,併將此基因插入到原覈錶達載體pET28a中進行錶達.以錶達純化的ICOSL蛋白為抗原免疫Balb/c小鼠,取小鼠脾髒提取總RNA,通過RT-PCR擴增小鼠的重鏈可變區和Linker(VH-linker)序列,以及輕鏈可變區和Linker(Vκ-linker)序列.經重組PCR將兩段基因連接起來,將VH/κ與pMD19-T載體鏈接產物轉化E.coli DH 5α,PCR鑒定併測序.[結果]VH和κ鏈得到正確的擴增,長度分彆為421和689 bp,VH/κ連接產物正確,連接產物長度為1079 bp.[結論]所採用的引物及反應條件能夠擴增齣目的基因,成功構建瞭鼠源抗ICOSL覈糖體展示抗體庫,為進行覈糖體展示體外篩選抗ICOSL特異性單鏈抗體奠定基礎.
[목적]구건출서원항ICOSL핵당체전시항체고.[방법]통과RT-PCR종인B림파류세포Daudi적총RNA중확증출ICOSL포외구기인,병장차기인삽입도원핵표체재체pET28a중진행표체.이표체순화적ICOSL단백위항원면역Balb/c소서,취소서비장제취총RNA,통과RT-PCR확증소서적중련가변구화Linker(VH-linker)서렬,이급경련가변구화Linker(Vκ-linker)서렬.경중조PCR장량단기인련접기래,장VH/κ여pMD19-T재체련접산물전화E.coli DH 5α,PCR감정병측서.[결과]VH화κ련득도정학적확증,장도분별위421화689 bp,VH/κ련접산물정학,련접산물장도위1079 bp.[결론]소채용적인물급반응조건능구확증출목적기인,성공구건료서원항ICOSL핵당체전시항체고,위진행핵당체전시체외사선항ICOSL특이성단련항체전정기출.
