国际检验医学杂志
國際檢驗醫學雜誌
국제검험의학잡지
INTERNATIONAL JOURNAL OF LABORATORY MEDICINE
2013年
12期
1503-1504,1507
,共3页
MYCT-1基因%慢病毒载体%胃肿瘤
MYCT-1基因%慢病毒載體%胃腫瘤
MYCT-1기인%만병독재체%위종류
目的 构建携带MYCT-1基因的重组慢病毒载体GV218-MYCT-1,并包装成慢病毒,为进一步研究及动物实验奠定基础.方法 MYCT-1基因片段经PCR扩增后,与酶切线性化的慢病毒载体进行定向连接,获得GV218-MYCT-1重组慢病毒载体并转化细菌感受态细胞.克隆菌落行PCR鉴定,对阳性的重组质粒进行测序并转入293T细胞,荧光显微镜下观察GFP表达并行Western blot鉴定.将重组质粒与慢病毒包装系统一同转染293T细胞进行病毒包装,实时荧光定量PCR法检测病毒滴度.结果 DNA测序结果及Western blot鉴定证实成功构建MYCT-1重组慢病毒载体,对其进行包装后测定慢病毒滴度为2×108TU/mL.结论 成功构建并包装MYCT-1重组慢病毒表达载体.
目的 構建攜帶MYCT-1基因的重組慢病毒載體GV218-MYCT-1,併包裝成慢病毒,為進一步研究及動物實驗奠定基礎.方法 MYCT-1基因片段經PCR擴增後,與酶切線性化的慢病毒載體進行定嚮連接,穫得GV218-MYCT-1重組慢病毒載體併轉化細菌感受態細胞.剋隆菌落行PCR鑒定,對暘性的重組質粒進行測序併轉入293T細胞,熒光顯微鏡下觀察GFP錶達併行Western blot鑒定.將重組質粒與慢病毒包裝繫統一同轉染293T細胞進行病毒包裝,實時熒光定量PCR法檢測病毒滴度.結果 DNA測序結果及Western blot鑒定證實成功構建MYCT-1重組慢病毒載體,對其進行包裝後測定慢病毒滴度為2×108TU/mL.結論 成功構建併包裝MYCT-1重組慢病毒錶達載體.
목적 구건휴대MYCT-1기인적중조만병독재체GV218-MYCT-1,병포장성만병독,위진일보연구급동물실험전정기출.방법 MYCT-1기인편단경PCR확증후,여매절선성화적만병독재체진행정향련접,획득GV218-MYCT-1중조만병독재체병전화세균감수태세포.극륭균락행PCR감정,대양성적중조질립진행측서병전입293T세포,형광현미경하관찰GFP표체병행Western blot감정.장중조질립여만병독포장계통일동전염293T세포진행병독포장,실시형광정량PCR법검측병독적도.결과 DNA측서결과급Western blot감정증실성공구건MYCT-1중조만병독재체,대기진행포장후측정만병독적도위2×108TU/mL.결론 성공구건병포장MYCT-1중조만병독표체재체.
