国际检验医学杂志
國際檢驗醫學雜誌
국제검험의학잡지
INTERNATIONAL JOURNAL OF LABORATORY MEDICINE
2013年
12期
1494-1496
,共3页
施静%朱冰%钟家禹%王长兵%许甜甜
施靜%硃冰%鐘傢禹%王長兵%許甜甜
시정%주빙%종가우%왕장병%허첨첨
肠道病毒71型%VP2蛋白%原核表达
腸道病毒71型%VP2蛋白%原覈錶達
장도병독71형%VP2단백%원핵표체
目的 利用大肠杆菌表达系统表达并纯化肠道病毒71型(EV71)VP2蛋白,并对重组蛋白功能进行初步鉴定.方法 PCR扩增EV71 VP2基因,在测序正确的基础上,将其插入表达载体形成pET32a(+)/VP2,转化BL21(DE3),IPTG诱导表达,经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)初步分析蛋白表达产物,利用Ni+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,经Western blot初步验证其抗原性.结果 成功构建pET32a(+)/VP2重组质粒,经大肠杆菌表达,纯化获得相对分子质量约为48 000的融合蛋白,经Western blot证实其抗原性良好.结论 表达并鉴定了VP2抗原,为EV71疫苗研制及检测试剂盒的研发奠定了基础.
目的 利用大腸桿菌錶達繫統錶達併純化腸道病毒71型(EV71)VP2蛋白,併對重組蛋白功能進行初步鑒定.方法 PCR擴增EV71 VP2基因,在測序正確的基礎上,將其插入錶達載體形成pET32a(+)/VP2,轉化BL21(DE3),IPTG誘導錶達,經十二烷基硫痠鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)初步分析蛋白錶達產物,利用Ni+親和層析柱對重組蛋白進行純化,經Western blot初步驗證其抗原性.結果 成功構建pET32a(+)/VP2重組質粒,經大腸桿菌錶達,純化穫得相對分子質量約為48 000的融閤蛋白,經Western blot證實其抗原性良好.結論 錶達併鑒定瞭VP2抗原,為EV71疫苗研製及檢測試劑盒的研髮奠定瞭基礎.
목적 이용대장간균표체계통표체병순화장도병독71형(EV71)VP2단백,병대중조단백공능진행초보감정.방법 PCR확증EV71 VP2기인,재측서정학적기출상,장기삽입표체재체형성pET32a(+)/VP2,전화BL21(DE3),IPTG유도표체,경십이완기류산납취병희선알응효전영(SDS-PAGE)초보분석단백표체산물,이용Ni+친화층석주대중조단백진행순화,경Western blot초보험증기항원성.결과 성공구건pET32a(+)/VP2중조질립,경대장간균표체,순화획득상대분자질량약위48 000적융합단백,경Western blot증실기항원성량호.결론 표체병감정료VP2항원,위EV71역묘연제급검측시제합적연발전정료기출.
