食品与生物技术学报
食品與生物技術學報
식품여생물기술학보
JOURNAL OF FOOD SCIENCE AND BIOTECHNOLOGY
2013年
7期
754-761
,共8页
唐自钟%刘姗%韩学易%姚友旭%刘默洋%陈惠%晋海军%吴琦%单志
唐自鐘%劉姍%韓學易%姚友旭%劉默洋%陳惠%晉海軍%吳琦%單誌
당자종%류산%한학역%요우욱%류묵양%진혜%진해군%오기%단지
枯草芽胞杆菌%内切葡聚糖酶%易错PCR%酶学性质
枯草芽胞桿菌%內切葡聚糖酶%易錯PCR%酶學性質
고초아포간균%내절포취당매%역착PCR%매학성질
Bacillus subtilis%endoglucanase%error-prone PCR%enzymatic properties
近年来随着纤维素酶在食品加工工业中具有广阔应用前景,而纤维素酶的工业应用一直受酶活性低,成本高的限制.为了提高中性内切葡聚糖酶的活性,作者利用易错PCR技术对来自枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)C-36的内切葡聚糖酶基因进行定向进化研究,构建了在大肠杆菌中的突变体库.通过刚果红平板筛选,获得了酶活性提高的突变株F-1O,活力比亲本酶提高4.2倍.序列分析表明:F-10有5个碱基发生突变,两个氨基酸突变:D212V和T307S.SDSPAGE条带,表明基因表达正确,而表达量较原始菌株显著增加.酶学性质分析,表明该酶的最适反应pH为5.6,最适反应温度为45℃,在pH 4.5～10.0范围内50℃保温30 min可保持80％的剩余酶活,在60～75℃酶活力相对稳定,可保持在最高酶活的80％以上,当温度高于75℃时,酶开始变性失活,酶活力迅速下降.研究获得了酶活性提高的内切葡聚糖酶菌株,为进一步在分子水平研究内切葡聚糖酶的功能和其应用打下了基础,也为高酶活酶分子在其他高表达系统的表达提供了基础材料.
近年來隨著纖維素酶在食品加工工業中具有廣闊應用前景,而纖維素酶的工業應用一直受酶活性低,成本高的限製.為瞭提高中性內切葡聚糖酶的活性,作者利用易錯PCR技術對來自枯草芽胞桿菌(Bacillus subtilis)C-36的內切葡聚糖酶基因進行定嚮進化研究,構建瞭在大腸桿菌中的突變體庫.通過剛果紅平闆篩選,穫得瞭酶活性提高的突變株F-1O,活力比親本酶提高4.2倍.序列分析錶明:F-10有5箇堿基髮生突變,兩箇氨基痠突變:D212V和T307S.SDSPAGE條帶,錶明基因錶達正確,而錶達量較原始菌株顯著增加.酶學性質分析,錶明該酶的最適反應pH為5.6,最適反應溫度為45℃,在pH 4.5～10.0範圍內50℃保溫30 min可保持80％的剩餘酶活,在60～75℃酶活力相對穩定,可保持在最高酶活的80％以上,噹溫度高于75℃時,酶開始變性失活,酶活力迅速下降.研究穫得瞭酶活性提高的內切葡聚糖酶菌株,為進一步在分子水平研究內切葡聚糖酶的功能和其應用打下瞭基礎,也為高酶活酶分子在其他高錶達繫統的錶達提供瞭基礎材料.
근년래수착섬유소매재식품가공공업중구유엄활응용전경,이섬유소매적공업응용일직수매활성저,성본고적한제.위료제고중성내절포취당매적활성,작자이용역착PCR기술대래자고초아포간균(Bacillus subtilis)C-36적내절포취당매기인진행정향진화연구,구건료재대장간균중적돌변체고.통과강과홍평판사선,획득료매활성제고적돌변주F-1O,활력비친본매제고4.2배.서렬분석표명:F-10유5개감기발생돌변,량개안기산돌변:D212V화T307S.SDSPAGE조대,표명기인표체정학,이표체량교원시균주현저증가.매학성질분석,표명해매적최괄반응pH위5.6,최괄반응온도위45℃,재pH 4.5～10.0범위내50℃보온30 min가보지80％적잉여매활,재60～75℃매활력상대은정,가보지재최고매활적80％이상,당온도고우75℃시,매개시변성실활,매활력신속하강.연구획득료매활성제고적내절포취당매균주,위진일보재분자수평연구내절포취당매적공능화기응용타하료기출,야위고매활매분자재기타고표체계통적표체제공료기출재료.
