成都医学院学报
成都醫學院學報
성도의학원학보
JOURNAL OF CHENGDU MEDICAL COLLEGE
2013年
3期
242-246
,共5页
戴小珍%王兰%潘克俭%何浪%李红%姜鹤群
戴小珍%王蘭%潘剋儉%何浪%李紅%薑鶴群
대소진%왕란%반극검%하랑%리홍%강학군
内皮祖细胞%分离培养%鉴定%管样结构
內皮祖細胞%分離培養%鑒定%管樣結構
내피조세포%분리배양%감정%관양결구
目的 建立体外分离培养及鉴定大鼠骨髓来源内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)的方法.方法 采用密度梯度离心法从大鼠骨髓中分离得到骨髓单个核细胞,并结合差时贴壁法,收集24 h后未贴壁细胞,然后用添加有多种细胞因子的内皮细胞基础培养基(endothelial basal medium,EBM-2)诱导培养获取EPCs.通过形态学观察、CD133和VEGFR-2抗体免疫荧光染色并结合FITC-UEA-1和Dil-ac-LDL的摄取功能来对EPCs进行鉴定分析,同时通过体外管样结构形成能力对EPCs进行功能性评价.结果 在EBM-2培养基中诱导培养7 d后,出现类似于血岛样的细胞集落,集落中央的细胞呈圆形,周边的细胞呈放射状;80%以上的细胞都是CD133+/VEGFR-2+细胞,并且这些细胞同时能够摄取Dil-ac-LDL和结合FITC-UEA-1;EPCs在基质胶表面形成管腔样结构.结论 密度梯度离心法结合差时贴壁法从骨髓中分离获得的单个核细胞,然后经EBM-2条件培养基诱导培养可获得较高纯度的EPCs.
目的 建立體外分離培養及鑒定大鼠骨髓來源內皮祖細胞(endothelial progenitor cells,EPCs)的方法.方法 採用密度梯度離心法從大鼠骨髓中分離得到骨髓單箇覈細胞,併結閤差時貼壁法,收集24 h後未貼壁細胞,然後用添加有多種細胞因子的內皮細胞基礎培養基(endothelial basal medium,EBM-2)誘導培養穫取EPCs.通過形態學觀察、CD133和VEGFR-2抗體免疫熒光染色併結閤FITC-UEA-1和Dil-ac-LDL的攝取功能來對EPCs進行鑒定分析,同時通過體外管樣結構形成能力對EPCs進行功能性評價.結果 在EBM-2培養基中誘導培養7 d後,齣現類似于血島樣的細胞集落,集落中央的細胞呈圓形,週邊的細胞呈放射狀;80%以上的細胞都是CD133+/VEGFR-2+細胞,併且這些細胞同時能夠攝取Dil-ac-LDL和結閤FITC-UEA-1;EPCs在基質膠錶麵形成管腔樣結構.結論 密度梯度離心法結閤差時貼壁法從骨髓中分離穫得的單箇覈細胞,然後經EBM-2條件培養基誘導培養可穫得較高純度的EPCs.
목적 건입체외분리배양급감정대서골수래원내피조세포(endothelial progenitor cells,EPCs)적방법.방법 채용밀도제도리심법종대서골수중분리득도골수단개핵세포,병결합차시첩벽법,수집24 h후미첩벽세포,연후용첨가유다충세포인자적내피세포기출배양기(endothelial basal medium,EBM-2)유도배양획취EPCs.통과형태학관찰、CD133화VEGFR-2항체면역형광염색병결합FITC-UEA-1화Dil-ac-LDL적섭취공능래대EPCs진행감정분석,동시통과체외관양결구형성능력대EPCs진행공능성평개.결과 재EBM-2배양기중유도배양7 d후,출현유사우혈도양적세포집락,집락중앙적세포정원형,주변적세포정방사상;80%이상적세포도시CD133+/VEGFR-2+세포,병차저사세포동시능구섭취Dil-ac-LDL화결합FITC-UEA-1;EPCs재기질효표면형성관강양결구.결론 밀도제도리심법결합차시첩벽법종골수중분리획득적단개핵세포,연후경EBM-2조건배양기유도배양가획득교고순도적EPCs.
