食品与生物技术学报
食品與生物技術學報
식품여생물기술학보
JOURNAL OF FOOD SCIENCE AND BIOTECHNOLOGY
2013年
7期
706-712
,共7页
龚燕燕%殷欣%邬敏辰%曾妍
龔燕燕%慇訢%鄔敏辰%曾妍
공연연%은흔%오민신%증연
宇佐美曲霉%阿魏酸酯酶A%基因克隆%表达%毕赤酵母%酶学性质
宇佐美麯黴%阿魏痠酯酶A%基因剋隆%錶達%畢赤酵母%酶學性質
우좌미곡매%아위산지매A%기인극륭%표체%필적효모%매학성질
Aspergillus usamii%feruloyl esterase A%gene cloning%expressing%Pichia pastoris%enzymatic characterization
本研究通过RT-PCR技术从宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)E001中克隆了编码阿魏酸酯酶A的成熟肽cDNA (AusfaeA),构建重组表达质粒pPIC9K-A usfaeA,将其经Sac Ⅰ线性化后转化毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115,通过抗G418筛选获得高拷贝重组子GS115/A usfaeA,用甲醇诱导表达重组阿魏酸酯酶(reAusFaeA).SDS-PAGE显示,纯化后的reAusFaeA为单一条带,其表观相对分子质量为36000;以阿魏酸甲酯为底物,经高效液相色谱法测定,该酶的酶活为29.4 U/mg; reAusFaeA的最适反应温度为45℃,并在45℃以下稳定;最适反应pH为5.0,在pH 4.0～6.0范围内稳定;多数测定的金属离子及EDTA对该酶的活性影响不大.结果表明在P.pastoris中成功实现了AusfaeA的异源表达,该重组酶优良的酶学性质表明其具有较大的工业应用潜力.
本研究通過RT-PCR技術從宇佐美麯黴(Aspergillus usamii)E001中剋隆瞭編碼阿魏痠酯酶A的成熟肽cDNA (AusfaeA),構建重組錶達質粒pPIC9K-A usfaeA,將其經Sac Ⅰ線性化後轉化畢赤酵母(Pichia pastoris)GS115,通過抗G418篩選穫得高拷貝重組子GS115/A usfaeA,用甲醇誘導錶達重組阿魏痠酯酶(reAusFaeA).SDS-PAGE顯示,純化後的reAusFaeA為單一條帶,其錶觀相對分子質量為36000;以阿魏痠甲酯為底物,經高效液相色譜法測定,該酶的酶活為29.4 U/mg; reAusFaeA的最適反應溫度為45℃,併在45℃以下穩定;最適反應pH為5.0,在pH 4.0～6.0範圍內穩定;多數測定的金屬離子及EDTA對該酶的活性影響不大.結果錶明在P.pastoris中成功實現瞭AusfaeA的異源錶達,該重組酶優良的酶學性質錶明其具有較大的工業應用潛力.
본연구통과RT-PCR기술종우좌미곡매(Aspergillus usamii)E001중극륭료편마아위산지매A적성숙태cDNA (AusfaeA),구건중조표체질립pPIC9K-A usfaeA,장기경Sac Ⅰ선성화후전화필적효모(Pichia pastoris)GS115,통과항G418사선획득고고패중조자GS115/A usfaeA,용갑순유도표체중조아위산지매(reAusFaeA).SDS-PAGE현시,순화후적reAusFaeA위단일조대,기표관상대분자질량위36000;이아위산갑지위저물,경고효액상색보법측정,해매적매활위29.4 U/mg; reAusFaeA적최괄반응온도위45℃,병재45℃이하은정;최괄반응pH위5.0,재pH 4.0～6.0범위내은정;다수측정적금속리자급EDTA대해매적활성영향불대.결과표명재P.pastoris중성공실현료AusfaeA적이원표체,해중조매우량적매학성질표명기구유교대적공업응용잠력.
